Dosagem dos níveis de anti-oxidantes enzimáticos e resistência celular ao estresse oxidativo, do sêmen de perdizes (Rhynchotus rufescens) criadas em cativeiro e suplementadas com selênio

Autor: Góes, Paola Almeida de Araújo
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2008
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Druh dokumentu: Tese de Doutorado
Popis: Considerando a importância comercial da perdiz (Rhynchotus rufescens), implantou-se algumas biotecnologias reprodutivas. Trinta animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: controle (sem selênio orgânico) e tratamento (com 0,2 a 0,8mg de selênio em 1000kgs de ração ), provenientes da FCAV-UNESP/Jaboticabal (2007-2008). Coletou-se semên por excitação manual que foram aliquotados em pools com 150µL. Após a avaliação do volume, motilidade, vigor, números de espermatozóides, concentração e morfologia espermática, diluiu-se 20µl de sêmen em 300µl de solução fisiológica para testar a Integridade das membranas acrossomal e plasmática e avaliação da atividade mitocondrial. Uma outra alíquota de 20µl foi utilizada para testar a resistência dos espermatozóides ao estresse oxidativo, induzido (vitamina C + sulfato ferroso), por meio da dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A amostra restante foi congelada diretamente em nitrogênio líquido para a realização do teste da integridade do DNA espermático e para medir a atividade das enzimas antioxidantes Catalase e Glutationa Peroxidase. Contou-se 200 células, para avaliação da integridade acrossomal e de membrana, atividade mitocondrial e ensaio cometa e classificou-as: 1) Acrossomo Íntegro: cor lilás e Não-Íntegro: róseo; 2)Células Vivas (não coradas) e Mortas (coradas), 3) Classes de I a IV, sendo Classe I (todas as mitocôndrias íntegras) com a peça intermediária totalmente corada e Classe IV (todas as mitocôndrias comprometidas) com a peça intermediária totalmente descorada e 4) Cometa I a IV, sendo Cometa I (DNA íntegro): células com halo ao seu redor e núcleo corado, porém sem cauda de cometa evidente e Cometa IV (DNA altamente fragmentado): célula com núcleo completamente descorado e apenas a cauda do cometa, respevtivamente. Os dados foram analisados pelo SAS, System for Windows. Nenhuma diferença foi encontrada para volume, motilidade, vigor, número de espermatozóides, concentração, integridade acrossomal, integridade da membrana plasmática, Classes I e III da atividade mitocondrial, Cometa I,II e IV, TBARS e atividade da Glutationa. Foram encontradas diferenças nas Classes II (Se=33,39±2,93 e Controle=44,39±2,59, p=0.0125 e IV (Se=3,44±0,09 e Controle=1,50±0,38, p=0.0401) e Cometa III (Se=16,00 ± 0,82 e Controle=34,75 ± 1,44, p=
Considering the commercial value of the partridges (Rhynchotus rufescens), the employment of reproductive biotechnologies has been attempted. Thirty animals were randomly assigned into two groups: control group (no selenium) and treatment group (supplemented with 0,2 a 0,8mg selenium/ 1000kgs ration). Animals were allocated at the FCAV - UNESP/Jaboticabal (2007-2008). Semen collections were performed by digital manipulation and divided in pools of at least 150µL. After the immediate evaluation of volume, motility, vigour, concentration and morphology, an aliquot of 20µL was diluted in 300µL of physiologic solution in order to test acrosome and membrane integrities and mitochondrial activity. Another aliquot of 20 µL was used to test the resistance of sperm against the induced oxidative stress (Vitamin C + ferrous sulphate), followed by the measurement of TBARS. The remaining semen sample was frozen directly in liquid nitrogen in orther to perform the comet assay and to measure the activity of the antioxidant enzymes catalase and glutathione peroxidase. Cells were evaluated respectively for acrosome and membrane integrities, mitochondrial activity and comet assay as follows: 1) Intact acrosome: lilac acrosome; Non-intact acrosome: pink acrosome; 2) Live cells: non stained; Dead: stained; 3) Classes I to IV, being Class I (full mitochondrial potential): midpiece totally stained and class IV (no mitochondrial potential): midpiece not stained; 4) Classes I to IV, being Class I (intact DNA): nucleus with intense fluorescence with no comet tail; Class IV (highly fragmented DNA): no nucleus, only a comet tail. Data was statistically anlysed using the SAS System for Windows. No differences were found on volume, motility, vigour, number of spermatozoa, concentration, acrosomal and membrane integrity, Classes I and III of mitochondrial activity, Comets I, II and IV, TBARS and Glutathione activity. Differences were found on as DAB Classes II (Se=33.39±2.93 and control=44.39±2.59, p=0.0125) and IV (Se=3.44±0.09 and control=1.50±0.38, p=0.0401) and comet class III (Se=16.00 ± 0.82 and control=34.75 ± 1.44, p=
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