Diversidade genética de Anaplasma marginale em bovinos de corte no Pantanal brasileiro
| Autor: | Ramos, Inalda Angélica de Souza. |
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| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2018 |
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| Druh dokumentu: | Text |
| Popis: | Orientador: Marcos Rogério André Coorientador: Rosangela Zacarias Machado Banca: Estevam Guilherme Lux Hoppe Banca: Darci Moraes Barros-Battesti Banca: Heitor Miraglia Herrera Banca: Isabel Kinney Ferreira de Miranda Santos Poucos são os estudos acerca da diversidade genética de Anaplasma marginale nos rebanhos bovinos brasileiros, principalmente no que diz respeito a bovinos de corte. O presente estudo teve como objetivo avaliar a diversidade genética de A. marginale, com base nos genes msp1α e msp4, em Bos taurus indicus amostrados no Pantanal brasileiro. Alíquotas de sangue com e sem EDTA foram colhidas de 400 bovinos (200 vacas e 200 bezerros) em cinco propriedades de cria e recria extensiva. Enquanto as amostras de soro foram submetidas ao Ensaio Imunoenzimático Indireto (iELISA) para detecção de anticorpos IgG anti-A. marginale, amostras de sangue total foram submetidas à avaliação do hematócrito e confecção de esfregaços sanguíneos corados pelo Giemsa, PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene msp1β, semi-nested (sn)PCR baseada no gene msp1α e PCR convencional (cPCR) baseada no gene msp4 para A. marginale. Os produtos amplificados nos ensaios de snPCR e cPCR foram purificados e sequenciados pelo Método de Sanger. Sequências do gene msp1α foram submetidas à análise de diversidade pelo software RepeatAnalyser. Sequências do gene msp4 foram submetidas à análise de distância Network pelo software Splitstree e de genótipos pelo Software DnaSP5 e PopART. Cinco animais (duas vacas e três bezerros) apresentaram corpúsculos de A. marginale em esfregaços sanguíneos. As frequências de animais positivos pelo iELISA, qPCR e snPCR foram de 72,25% (289/400), 56,75% (227/400) e 22,9% (52/227)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) There are few studies about the genetic diversity of Anaplasma marginale in Brazilian cattle herds, especially with regard to beef cattle. The present study aimed to evaluate the genetic diversity of A. marginale based on the msp1α and msp4 genes in Bos taurus indicus, sampled in the Brazilian Pantanal. Blood aliquots with and without EDTA were collected from 400 cattle (200 cows and 200 calves) in five extensive breeding and rearing properties. While the serum samples were submitted to the Indirect Immunoenzyme Assay (iELISA) for the detection of anti-A. marginale IgG antibodies, whole blood samples were submitted to the evaluation of hematocrit and Giemsa-stained blood smears, quantitative real-time PCR (qPCR) based on the msp1β gene, semi-nested (sn) PCR based on the msp1α gene and conventional PCR (cPCR) based on the msp4 gene for A. marginale. The amplified products obtained in the snPCR and cPCR assays were purified and sequenced by the Sanger Method. Sequences of the msp1α gene were submitted to diversity analysis by the RepeatAnalyser software. msp4 gene sequences were submitted to Network distance analysis using the Splitstree software and genotypes analysis by the DnaSP5 and PopART software. Five animals (two cows and three calves) presented A. marginale corpuscles in blood smears. The frequencies of iELISA positive animals, qPCR and snPCR were 72.25% (289/400), 56.75% (227/400) and 22.9% (52/227), respectively. The iELISA and qPCR tests showed weak kappa concordance. Cows (154/200) were statistically more seropositive than calves (135/200) (P Doutor |
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