Koneksino 36 plyšinių jungčių valdymas lipofiliniais junginiais ir viduląstelinio magnio jonais

Autor: Marandykina, Alina
Jazyk: litevština
Rok vydání: 2013
Předmět:
Druh dokumentu: Doctoral Thesis
Popis: Plyšinių jungčių (PJ) reguliacija yra svarbi esant normalioms ir patologinėms sąlygoms. Šiame darbe pirmą kartą parodome, kad trumpagrandžiai alkoholiai (pentanolis–heptanolis) stimuliuoja PJ laidumą, o ilgagrandžiai (oktanolis–dekanolis) – blokuoja. Heksanolis didina Cx36 PJ funkcinį efektyvumą ir mažina jautrumą įtampai slopindamas blokuojantį endogeninės arachidono rūgšties (AR) poveikį. Endogeninės arachido rūgšties įtaką Cx36 PJ laidumui tyrėme, panaudodami jaučio serumo albuminą (JSA), fosfolipazių slopiklį metilarachidonilfluorofosfonatą ir aktyviklį tapsigarginą. Cx36 reguliacija HeLa kultūroje buvo tokia pati pelės kasos Langerhanso salelių β ląstelėse natyviai gaminančiose Cx36. Taip pat parodėme, kad [Mg2+]i reguliuoja Cx36 ir Cx47 PJ elektrinį laidumą, keisdamas funkcinių kanalų skaičių ir jų atsidarymo tikimybę, tačiau neveikia vienetinio kanalo laidumo. Nustatėme, kad TM2 ir TM4 domenai su juose esančiais cisteinais yra svarbūs trumpagrandžių alkoholių ir izoflurano prisijungimui bei kanalų valdymui jungties įtampa, tuo tarpu TM2 domenas ir CL kilpa gali būti potencialiais struktūriniais elementais, formuojant ilgagrandžių alkoholių prisijungimo kišenę(es).
Regulation of gap junctions (GJs) is important in normal and pathological conditions. In this study we show for the first time that short carbon chain n-alkanols (SCCAs; pentanol–heptanol) stimulate intercellular communication while long carbon chain n-alkanols (LCCAs; octanol–decanol) block it. SCCAs increase junctional conductance of Cx36 GJ channels by interfering with endogenous arachidonic acid (AA) dependent inhibition, increasing the open probability and a fraction of functional channels. We also evaluated the role of endogenous AA using other activators of Cx36 GJs coupling – bovine serum albumin (BSA) and inhibitor of phospholipase A2 isoforms methyl arachidonyl fluorophosphonate (MAFP). The observed regulation of Cx36 by SCCAs and AA in HeLa cells was the same as in β cells from mouse pancreas, natively producing Cx36. Furthermore we demonstrate that junctional conductance of Cx36 and Cx47 is regulated by [Mg2+]i in a concentration-dependent way in HeLa cells. [Mg2+]i affects the channel open probability and the number of functional channels, however, it has no impact on single channel conductance. We found that cysteines in the TM2 and TM4 domains are involved in binding of SCCAs and isoflurane and in regulation of gating properties of Cx36. Also, TM2 domain and CL loop could be potential structural elements forming binding cavity/ies for LCCAs.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
Externí odkaz: