Termostabilūs pektiną degraduojantys fermentai: Geobacillus genties bakterijų pektinolizinio aktyvumo tyrimai
| Autor: | Petkauskaitė, Raimonda |
|---|---|
| Jazyk: | litevština |
| Rok vydání: | 2014 |
| Předmět: | |
| Druh dokumentu: | Master's Thesis |
| Popis: | Pektinas sudaro didžiausią makromolekulių masę, kuri randama pirminės augalų ląstelių sienelės bei tarpinės plokštelės, atsakingos už tarpląstelinę adheziją, sudėtyje. Pektininė matrica sukuria pagrindą celiuliozės-glikanų tinklui, lemia jo tąsumą, taip pat atsako už porų susidarymą bei yra pagrindinė adhezinė medžiaga tarp ląstelių (Willats, McCartney et al. 2001). Šio polisacharido pagrindą sudaro α-(1-4)-glikozidiniais ryšiais sujungtos D-galakturono rūgšties liekanos (GalpA) ir mažesnė dalis kitų sacharidų, tokių kaip L-ramnozė, arabinozė, galaktozė ir ksilozė. GalpA karboksigrupės yra iš dalies esterintos metoksigrupių ir iš dalies arba visiškai neutralizuotos natrio, kalio ar amonio jonų. Pektiną degraduojantys fermentai, trumpiau vadinami pektinazėmis, sintetinami pačių augalų, taip pat fitopatogeninių bakterijų ir grybų (http://pec.biodbs.info/listofMicroorganisms. .html). Šie fermentai yra klasifikuojami pagal tris kriterijus: a) specifiškumą tam tikram polisacharidui (substratui) arba keliems; b) substrato grandinės skėlimo reakcijos mechanizmą; c) skėlimo vietą substrato grandinėje. Netrukus po šių fermentų atradimo, susidomėta jų pramoniniu pritaikomumu, kuris pasirodė besąs ganėtinai platus: sulčių, kavos, arbatos, augalinio aliejaus, popieriaus ir gyvūnų ėdalo gamyboje, tekstilės pramonėje ir net nuotekų valyme (Kashyap, Vohra et al. 2001). Šiuo metu dar didesnis dėmesys skiriamas termostabiliems pektiną degraduojantiems fermentams, kurie pramonėje gali... [toliau žr. visą tekstą] Plants, bacteria and fungi are known to synthesize pectic polysaccharides degrading enzymes called pectinases. These enzymes are important for plant growth and development, fruit ripening, phytopathogenesis etc. The aim of this study was to select biotechnologically important strains of endospore- forming bacteria with the highest pectinolytic activity as well as characterize pectinolytic enzymes from the crude protein extract. 8 out of 80 tested strains were selected for the experiments of growth curve measurement. PCR and 16S rRNA gene sequence analysis ascertained that two pectinolytic strains with the highest activity are closely related to Geobacillus thermodenitrificans NG80-2. Accordingly, these two strains were named Geobacillus sp. strain No. 3 and No. 4. Further analysis was performed with Geobacillus sp. strain Nr. 3 which was grown in the liquid medium with pectin. The crude protein extract was prepared using supernatant of the culture and then analysed spectrofotometrically for lyases and hydrolases activity, pectic substrates specificity, and thermostability. For further examinations electrophoretic and zymografic analyses were used. It was demonstrated that Geobacillus sp. strain No. 3 secretes at least two enzymes: pectin and polygalacturonic acid lyase and pectin hydrolase. For lyase, molecular mass (60-70 kDa), temperature optimum (60 °C) and pH optimum (7.0) were determined. |
| Databáze: | Networked Digital Library of Theses & Dissertations |
| Externí odkaz: |
|