Anemia falciforme: crises vaso-oclusivas parecem estar relacionadas à reduÃÃo da concentraÃÃo de proteÃnas na membrana eritrocitÃria

Autor: Iara Veras De AraÃjo
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2015
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFCUniversidade Federal do CearáUFC.
Druh dokumentu: masterThesis
Popis: CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior
FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico
A anemia falciforme à uma doenÃa genÃtica frequente, decorrente de uma modificaÃÃo pontual na posiÃÃo seis do gene da hemoglobina, que resulta em alelos diferentes, que quando transcrito, codifica a hemoglobina S, que leva a formaÃÃo das hemÃcias falcÃmicas. As hemÃcias contendo hemoglobina S adquirem, em condiÃÃes de hipÃxia, a forma de foice, causando crise vaso oclusiva nos portadores. O presente trabalho teve como objetivo isolar proteÃnas da membrana eritrocitÃria de pacientes com anemia falciforme (nas fases sintomÃtica e assintomÃtica) e correlacionar alteraÃÃes identificadas nestes perÃodos, utilizando Cromatografia LÃquida de Alta PressÃo (HPLC)-Troca iÃnica, SDS-PAGE 1D e 2D e Espectrometria de Massa (MS). Foi realizada anÃlise proteÃmica em proteÃnas de membrana eritrocitÃria obtidas de amostras de sangue perifÃrico de trÃs pacientes, colhidas ao longo de dois anos, e separadas de acordo com a presenÃa (PC) ou ausÃncia de crise vaso oclusiva (PSC) no momento da coleta. O grupo controle foi formado por dois indivÃduos sem diagnÃstico de hemoglobinopatia. Foi identificada a presenÃa de maior concentraÃÃo de proteÃnas na membrana de eritrÃcitos falcÃmicos, em especial nos pacientes PSC e evidenciou-se que durante as crises a quantidade de proteÃna presente na membrana do eritrÃcito dos pacientes sofre reduÃÃo (20,7% - PC1; 34,2% - PC3 e 45,2% - PC2). Dentre as 159 proteÃnas extraÃdas da membrana de eritrÃcitos falcÃmicos, 148 foram identificadas, e 11 nÃo foram identificadas, usando-se como parÃmetro a base de dados TagIdent ExPASy. Dentre as proteÃnas nÃo identificadas, seis foram extraÃdas da membrana eritrocitÃria de pacientes PC e cinco de pacientes PSC. A identificaÃÃo da proteÃna PRDX2 (uma peroxirredoxina com massa molecular aparente de 41 kDa) com massa molecular aparente inferior a 30 kDa sugere a alteraÃÃo estrutural desta proteÃna. A nÃo identificaÃÃo de 11 proteÃnas extraÃdas da membrana de eritrÃcitos falcÃmicos sugere alteraÃÃo quantitativa na expressÃo proteica destes pacientes. Nossos resultados sugerem ainda que as crises vaso-oclusivas podem estar relacionadas a uma reduÃÃo na concentraÃÃo total de proteÃnas da membrana eritrocitÃria nos pacientes.
Sickle cell anemia is a common genetic disorder resulting from a specific change in position six of the hemoglobin gene, which results in different alleles, which when transcribed, codes for hemoglobin S which leads to the formation of sickle erythrocytes. Red blood cells containing hemoglobin S acquire in hypoxic conditions, the sickle-shaped, causing vaso-occlusive crisis in patients. This study aimed to isolate erythrocyte membrane proteins of patients with sickle cell anemia (in symptomatic and asymptomatic stages) and to correlate changes identified in these periods, using High Performance Liquid Chromatography (HPLC - ion exchange), SDS-PAGE (1D and 2D) and Mass Spectrometry (MS-ESI)). Was performed proteomic analysis in erythrocyte membrane proteins obtained from peripheral blood samples from three patients, collected over two years, and separated according to the presence (PC) or absence of vaso-occlusive crisis (PSC) at the time of collection. The control group consisted of two individuals with no diagnosis of hemoglobinopathies. We identified the presence of a higher concentration of membrane proteins in sickle cell erythrocytes, particularly in CSP patients and showed that during attacks the amount of protein present in the erythrocyte membrane of patients undergoes reduction (20.7% -PC1; 34 2% - PC3 and 45.2% - PC2). Among the 159 membrane proteins extracted from sickle cell erythrocytes, 148 were identified and 11 were not identified, using as parameter the database ExPASy TagIdent. Among the proteins not identified, six were extracted from the plasma membrane of PC patients and five PSC patients. The identification of PRDX2 protein (peroxiredoxin with an apparent molecular mass of 41 kDa) with an apparent molecular weight below 30 kDa, suggesting the structural change of this protein. Failure to identify 11 proteins extracted membrane of sickle cell erythrocytes suggests quantitative changes in protein expression of these patients. Our results also suggest that the vaso-occlusive crises may be related to a reduction in total protein concentration of the erythrocyte membrane in patients.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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