Efeito da clorofilina na expressão de genes envolvidos na apoptose e ciclo celular em células de mama não tumorais (HB4a)

Autor: Gláucia Fernanda Rocha D'Epiro
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2012
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UELUniversidade Estadual de LondrinaUEL.
Druh dokumentu: masterThesis
Popis: A molécula de clorofilina é muito estudada pela comunidade científica por apresentar, entre outras, propriedades quimiopreventiva, antimutagênica e anticarcinogênica. No entanto, os mecanismos moleculares de ação desse composto ainda não estão esclarecidos. Dessa maneira, o estudo de genes envolvidos na apoptose e no ciclo celular em células não tumorais tratadas com clorofilina pode fornecer informações importantes sobre os mecanismos que protegem ou desencadeiam toxicidade ás células, auxiliando na compreensão e no desenvolvimento de terapias. Neste contexto, nós avaliamos o potencial citotóxico da clorofilina e o seu efeito na expressão de genes envolvidos na apoptose (anti e pró-apoptóticos: BCL-2, BCL-XL, BAX E BAK; da família das Caspases: CASP3, CASP7, CASP 8 e CASP9) e de ciclo celular (BIRC5, TP53, APC, CiclinaA2 e β-catenina) em cultura de células de mama não tumorais (HB4a). No ensaio de citotoxicidade a clorofilina apresentou potencial citotóxico em 48 e 72 h em todas as concentrações utilizadas (100, 200 e 400 µg/mL) quando comparadas ao controle. O estudo da expressão gênica foi realizado por meio do ensaio de qRT-PCR em tempo real. As células HB4a foram expostas à 100 e 200 g/mL de clorofilina nos tempos de 24, 48 e 72 h. A redução dos níveis de BIRC5, relacionado aos processos de apoptose e ciclo celular foi dose dependente, o gene foi menos expresso no tratamento com 200 µg/mL de clorofilina em 24, 48 e 72 h. O gene CCNA2 foi menos expresso com 24, 48 e 72 h de exposição à 200 µg/mL de clorofilina, e com 72 h de exposição à 100 µg/mL. Em relação aos genes pró-apoptóticos, foi observado aumento significativo na expressão de BAX em 24, 48 e 72 h de exposição à 200 µg/mL de clorofilina, e em 72 h de exposição à 100 µg/mL. Não houve alteração significativa de BAK quando comparado ao controle. Também foi observado aumento de expressão dos anti-apoptóticos BCL-2 e BCL-XL. O gene BCL-XL apresentou aumento de expressão nos três tempos testados com 200 µg/mL de clorofilina, e a exposição à 100 µg/mL levou ao aumento de expressão somente em 24 h. Já o gene BCL-2 obteve aumento de expressão apenas em 72 h com 200 µg/mL de clorofilina. Os demais genes analisados não apresentaram alteração significativa. A inibição da expressão dos genes envolvidos no ciclo celular sugere um efeito decorrente da citotoxicidade da clorofilina, bem como o aumento da expressão dos genes pró-apoptóticos, enquanto que o aumento da expressão dos genes anti-apoptóticos sugere inibição da apoptose como proteção da morte celular induzida pela clorofilina.
The molecule of chlorophyllin has been the subject of the scientific community by presenting, among others, chemopreventive, antimutagenic and anticarcinogenic properties. However, the molecular mechanisms of action of this compound remain unclear. Thus, the study of genes involved in apoptosis and cell cycle in non-tumor cells treated with chlorophyllin can provide important information about the mechanisms that protect or trigger damaging processes in these cells, aiding in the development of therapies and treatments. In this context, we evaluated the effect of cytotoxic potential of chlorophyllin and its effect on the expression of genes involved in apoptosis (anti and pro-apoptotic: BCL-2, BCL-XL, BAX and BAK, the family of Caspases: CASP3, CASP7, CASP8 and CASP9) and cell cycle (BIRC5, TP53, APC, β-catenin and CCNA2) on cultured non-tumor breast cells (HB4a). In the cytotoxicity assay chlorophyllin was cytotoxic 48 and 72 h at all concentrations (100, 200 and 400 µg/mL) used when compared to control. The study of gene expression was performed by qRT-PCR assay. HB4a cells were exposed to 100 and 200 µg/mL of chlorophyllin at 24, 48 and 72 h. The reduced levels of BIRC5 related to the processes of apoptosis and cell cycle was dose dependent, the gene was downregulated with 200 µg/mL of chlorophyllin at 24, 48 and 72 h. The CCNA2 gene was downregulated at 24, 48 and 72 h with 200 µg/mL of chlorophyllin, and at 72 h with 100 µg/mL of exposure. In relation to the pro-apoptotic genes, it was observed a significant increase in expression of BAX at 24, 48 and 72 h of exposure at 200 µg/mL of chlorophyllin, and 72 h of exposure at 100 µg/mL. BAK was not significant change when compared with control. It was also observed increased expression of anti-apoptotic BCL-2 and Bcl-XL. The gene BCL-XL showed increased expression in three times tested with 200 µg/mL of chlorophyllin, and exposure to 100 µg/mL led to increased expression in 24 h. Since the BCL-2 gene had an increase of expression only in 72 hours with 200 µg/mL of chlorophyllin. The other genes analyzed did not show significant change. Inhibition on the genes expression involved in cell cycle suggests an effect due to the cytotoxicity of chlorophyllin, and the increased expression of pro-apoptotic genes, while the increased expression of anti-apoptotic genes suggests inhibiting apoptosis and protection from death induced cellular chlorophyllin.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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