Efeito do fator de crscimento semelhante à insulina-I (IGF-I) e do fator de crescimento e diferenciação-9 (GDF-9) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais ovinos

Autor: MONTE, Alane Pains Oliveira do
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2018
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRPEUniversidade Federal Rural de PernambucoUFRPE.
Druh dokumentu: Doctoral Thesis
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Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq
The objective of this work was to study the effect of the insulin like growth factor-1(IGF-1) and growth differentiation factor-9 (GDF-9) on the in vitro development of sheep preantral follicles. For this, three experimental phases were developed. The first phase evaluated the effect of IGF-I on the in vitro culture of sheep isolated secondary follicles. Sixteen ovaries were allocated for the immunolocalization of IGF-I protein. Isolated secondary follicles of other ovaries were cultured for 18 days in control medium (MEM+) or MEM+ supplemented with different concentrations of IGF-I (10, 50 and 100 ng/mL) or the same treatments with the addition of 750 ng/ml of FSH. At the end of the culture, fluorescence, in vitro maturation (IVM) or LH receptor (LHR) expression analyzes were performed. Phase 2 evaluated the influence of GDF-9 on the development of preantral follicles cultured in situ. For this, ovarian fragments were cultured for 7 days in MEM or in MEM supplemented with of GDF-9 (1, 50, 100, 200 or 400 ng/mL). In addition, a second culture in MEM or MEM + 50 ng/mL of GDF-9 was performed in the presence or absence of the PI3K pathway inhibitor. At the end of culture, follicular survival, activation and diameter, immunolocalization of PCNA, activated caspase-3 and pAKT proteins were evaluated. In the phase three, isolated secondary follicles were cultured for 12 days in MEM or MEM + GDF-9 (1, 10, 50 or 100 ng/mL). At the end of culture, oocytes were submitted to IVM, follow by mitochondrial activity and ROS analysis. The results of phase 1 showed that 50 ng/mL of IGF-I + FSH showed more fully-grown oocytes (P
O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I) e do fator de crescimento e diferenciação-9 (GDF-9) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais ovinos. Para isto, foram desenvolvidas três fases experimentais. A primeira fase avaliou o efeito do IGF-I sobre o cultivo in vitro de folículos secundários isolados de ovelhas. Parte dos ovários foram destinados à imunolocalização da proteína para o IGF-I. Os folículos secundários isolados dos demais ovários foram cultivados por 18 dias no meio controle (MEM+) ou no MEM+ associado de diferentes concentrações de IGF-I (10, 50 e 100 ng/mL), ou nos mesmos tratamentos adicionados de 750 ng/mL de FSH. Ao final do cultivo, foram realizadas análises de fluorescência, maturação in vitro (MIV) ou expressão do receptor de LH (LHR). A fase 2 avaliou a influência do GDF-9 no desenvolvimento de folículos pré-antrais cultivados in situ. Para isso, fragmentos ovarianos foram cultivados por 7 dias em MEM ou em MEM adicionado de GDF-9 (1, 50, 100, 200 ou 400 ng/mL). Além disso, foi realizado um segundo cultivo em MEM ou em MEM + 50 ng/mL de GDF-9, na presença ou ausência do inbidor da via PI3K. Ao final, os fragmentos foram avaliados quanto à sobrevivência, ativação, diâmetro e imunolocalização das proteínas PCNA, caspase-3 ativada e pAKT. Na fase três, folículos secundários isolados foram cultivados por 12 dias em MEM ou MEM + GDF-9 (1, 10, 50 ou 100 ng/mL). Ao final do cultivo, os oócitos foram submetidos à MIV e, posteriormente, à análise de atividade mitocondrial e ERO. Os resultados da fase 1 mostraram que 50 ng/mL de IGF-I + FSH apresentou mais oócitos totalmente crescidos (P
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