Avalia??o da viabilidade, ades?o e prolifera??o de c?lulas tronco da medula ?ssea e fibroblastos NIH3T3 cultivadas em matriz de PLGA com rhGH

Autor: Gerzson, Alexandre da SIlveira
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2016
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da PUC_RSPontifícia Universidade Católica do Rio Grande do SulPUC_RS.
Druh dokumentu: Doctoral Thesis
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Biomaterials, as an alternative to autogenous bone and other biological tissues, have been widely used in oral and maxillofacial surgery. In this context, a biomaterial that functions as a scaffold (osteoconductor), combined with a growth factor (osteoinductor), would be of great interest for clinical application. Biodegradable polymers used for slow drug release have been investigated, demonstrating good results and interesting potential. Growth hormone (rhGH) may be released by incorporating it into these polymers. This study aimed to evaluate cell adhesion and proliferation of a polymeric biomaterial for slow release of rhGH. PLGA and PLGA/PCL (at a 70/30 ratio of PLGA to PCL) matrices were prepared by the solvent evaporation method, combined or not with GH. The biomaterials were tested for toxicity and cell viability using an MTT assay with NIH3T3 mouse cells (ATCC). Cell toxicity was assessed at 24, 48, 72 hours, and 7 days of biomaterial exposure to culture medium. After were tested?for cell adhesion and proliferation by culture in mesenchymal stem cells derived from Wistar rat bone marrow, DAPI staining, and subsequent cell counting, in addition to scanning electron microscopy. Cell adhesion and proliferation was assessed at 24 and 72 hours of biomaterial exposure to culture medium. All polymers had high cell viability rates. However, from 48 hours onwards, the groups with rhGH-polymer combinations had better results than the polymer groups without association with GH when compared to the control group. At 7 days of culture, only the pure PLGA matrix showed a significant difference from the control group. These results may suggest a preference of cells for the presence of rhGH in the biomaterial in culture medium? especially in the PLGA matrix. GH appeared to contribute to the increase in cell viability observed at some assessment time points, especially when combined with PLGA as compared to pure PLGA. All tested polymers exhibited cell adhesion and proliferation. However, PLGA-based biomaterials, especially when combined with rhGH, showed greater cell proliferation when the difference in growth from 24 to 72 hours was evaluated. rhGH appeared to modify the polymer surface, with increased roughness and microporosity. This feature was more evident in the PLGA+rhGH combination. Further studies are required to clarify this potential for development of new biomaterials.
Biomateriais como alternativas ao osso aut?geno e outros tecidos biol?gicos, s?o muito utilizados no tratamento de pacientes na rotina cir?rgica da regi?o maxilofacial. Neste contexto, um biomaterial com caracter?sticas de arcabou?o (osteocondutor), e associado ? um fator de crescimento (osteoindutor), seria de grande interesse para pesquisa e aplica??o cl?nica. Pol?meros biodegrad?veis, utilizados para a libera??o lenta de medicamentos, vem sendo estudados, demonstrando bons resultados e interessante potencial. o rhGH pode ser liberado atrav?s da sua incorpora??o ? estes pol?meros. Desta forma, se faz necess?rio a avalia??o da biocompatibilidade e toxicidade de um biomaterial polim?rico para libera??o lenta do medicamento. Atrav?s da t?cnica de evapora??o de solvente foram preparados matrizes de PLGA e PLGA/PCL na raz?o 70/30 de PLGA e PCL, respectivamente, associados ou n?o ao rhGH. Os biomateriais foram testados relacionados ? sua toxicidade e viabilidade celular, atrav?s de um ensaio de MTT com c?lulas de camundongo NIH 3T3 ATCC. A avalia??o da toxicidade celular foi realizada nos tempos de 24 horas, 48 horas, 72 horas e 7 dias de exposi??o dos biomateriais com o meio de cultura. Ap?s, os biomateriais foram testados relacionados ? sua ades?o e prolifera??o celular, atrav?s do cultivo em c?lulas-tronco mesenquimais de rato Wistar, com ensaio de colora??o DAPI e posterior contagem celular, al?m de microscopia eletr?nica de varredura. A avalia??o da ades?o e prolifera??o celular foi realizada nos tempos de 24 e 72 horas de exposi??o dos biomateriais com o meio de cultura. Todos os pol?meros testados apresentaram altas taxas de viabilidade celular, por?m, os grupos associados ao rhGH parecem demonstrar melhores resultados do que os grupos de pol?meros sem associa??o ao horm?nio quando comparados ao grupo controle em alguns per?odos do experimento. O que pode sugerir uma prefer?ncias das c?lulas ? presen?a do rhGH no biomaterial presente no meio de cultura, principalmente na matriz de PLGA. Os pol?meros testados, apresentaram ades?o e prolifera??o celular, por?m, os biomateriais ? base de PLGA, principalmente associados ao rhGH pareceram demonstrar maior prolifera??o celular quando avaliada a diferen?a do crescimento de 24 para 72horas. O GH modificou a superf?cie do pol?mero, aumentando a rugosidade e microporosidade. Aspecto visualizado principalmente quando incorporado ao PLGA. Mais estudos s?o necess?rios para verificar alternativas de novos biomateriais para libera??o lenta de f?rmacos.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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