Avaliação in vitro da atividade antiviral de extratos de plantas frente ao metapneumovirus aviário (AMPV) e vírus respiratório sincicial bovino (BRSV)
| Autor: | Martini, Matheus Cavalheiro, 1983 |
|---|---|
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2010 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Repositório Institucional da UnicampUniversidade Estadual de CampinasUNICAMP. |
| Druh dokumentu: | masterThesis |
| Popis: | Orientadores: Clarice Weis Arns, Luciana Konecny Kohn Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Made available in DSpace on 2018-08-16T18:01:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martini_MatheusCavalheiro_M.pdf: 571995 bytes, checksum: 52ec8a0bed8fa3efd4434ec2a2e6a100 (MD5) Previous issue date: 2010 Para avaliar a atividade antiviral dos extratos de plantas brasileiras foram eleitos o Metapneumovirus aviário (aMPV) e o vírus Respiratório sincicial bovino (BRSV) pertences à família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, gêneros Metapneumovirus e Pneumovirus respectivamente. Tanto o aMPV quanto o BRSV são vírus semelhantes aos que causam doenças em humanos como o vírus respiratório sincicial humano (HRSV) e metapneumovírus humano (hMPV). O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antiviral de 12 diferentes espécies de plantas: Pterodon emarginatus Vogel.; Kielmeyera coriacea Mart. & Zucc.; Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen; Virola sebifera Aubl.; Gaylussacia brasiliensis (Spreng.) Meisn.; Maytenus ilicifolia (Schrad.) Planch.; Bursera aloexylon (Schiede ex Schltdl.) Engl.; Aspidosperma tomentosum Mart.; Copaifera langsdorffii Desf; Baccharis dracunculifolia DC.; Arrabideae chica (Humb. & Bonpl.) B.Verl.; Aniba rosaeodora Ducke (Lin 3). Para realizar os estudos antivirais foi utilizada concentrações máximas não tóxicas para as diferentes linhagens celulares utilizadas frente aos dois vírus. Para os ensaios antivirais foram utilizadas a linhagens CER (Chicken embryo related cells) e CRIB (bovine viral diarrhea virus-resistant clone of MDBK cells) para o aMPV e BRSV respectivamente. Os extratos brutos com atividade antiviral foram submetidos a uma curva concentração resposta com diferentes concentrações de extrato na presença de 100 DICC/mL de cada amostra viral através do ensaio colorimétrico MTT [3-(4,5- dimetiltiazol-z-yl)-2,5 difeniltertrazolim brometo] determinando assim a concentração antiviral 50% (EC50). Para determinar o mecanismo de ação dos extratos e os vírus nas células foram utilizados três diferentes tratamentos: (i) Pré-tratamento (célula tratada com extrato e posterior inoculação com a amostra viral); (ii) Pós-tratamento (célula inoculada com a amostra viral e depois tratada com o extrato); (iii) Virucida (extrato e vírus mantidos juntos e posterior inoculação na cultura celular). O extrato foi considerado ativo quando houve diminuição do título viral em 1,5 log em relação ao titulo viral controle. Os resultados mostraram que todos os extratos testados obtiveram concentrações não tóxicas para as diferentes linhagens celulares. Em relação à atividade antiviral o extrato da espécie Aspidosperma tomentosum apresentou atividade frente ao BRSV e aMPV, ambos no pré-tratamento. Os extratos das espécies Virola sebifera; Arrabidaea chica; Gaylussacia brasiliensis e Anniba rosaeodora apresentaram atividade antiviral para o aMPV no pós-tratamento. Nenhum extrato bruto apresentou atividade de "vírus-inativação" em relação aos vírus avaliados. Os demais extratos não apresentaram atividade antiviral significativa para nenhum destas espécies virais. O ensaio antiviral deste estudo poderá continuar sendo utilizado como triagem para outras espécies em busca de substâncias com potencial medicinal. As diferentes atividades de ação dos extratos sugerem a ocorrência de mecanismo de ação distinto entre os vírus avaliados To evaluate the antiviral activity of extracts from Brazilian plants two different viruses were elected Avian metapneumovirus (aMPV) and bovine respiratory syncytial virus (BRSV) members of the family Paramyxoviridae, subfamily Pneumovirinae, Pneumovirus and Metapneumovirus genera respectively. Both viruses are similar to those that cause humans diseases such as respiratory syncytial virus (HRSV) and human metapneumovirus (hMPV). The purpose of this study was to assess the antiviral activity of 12 different plant species: Pterodon emarginatus Vogel; Kielmeyera coriácea Mart. & Zucc.; Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen; Virola sebifera Aubl.; Gaylussacia brasiliensis (Spreng.) Meisn.; Maytenus ilicifolia (Schrad.) Planch. ex. Reiss; Bursera aloexylon (Schiede ex Schltdl.) Engl.; Aspidosperma tomentosum Mart.; Copaífera langsdorffii Desf.; Baccharis dracunculifolia DC.; Arrabideae chica (Humb. & Bonpl.) B.Verl.; Aniba rosaeodora Ducke. (Lin 3). To perform the antiviral assay we used non toxic maximum concentrations of the plants extracts with different cell lines used against the two viruses. The cell lines used were CER (Chicken embryo related cells) and CRIB (bovine viral diarrhea resistant clone of MDBK cells) for AMPV and BRSV, respectively. The extracts with antiviral activity were subjected to a concentration response curve with varying concentrations of extract in the presence of 100 TCID / mL of each viral sample by colorimetric MTT assay [3 - (4,5- dimethylthiazol-z-yl) -2, 5-diphenyltetrazolium bromide] to identify the antiviral 50% concentration (EC50). To define the mechanism of action of extracts and viruses in cells three different treatments were used: (i) pre-treatment (cells treated with plants extracts and subsequent inoculation with a viral sample), (ii) Post-treatment (cells inoculated with the viral sample and afterwards treated with the extract), (iii) Virucidal (viruses and plants extracts were kept together and after that inoculated into cell cultures). The extract was considered active when there was a decrease of virus titers by 1.5 log in contrast to the control viral titer. The results revealed that all tested extracts had no toxic concentrations for the different cell lines and detected the antiviral activity of the extract of the species Aspidosperma tomentosum against the BRSV and aMPV, both in the pretreatment conditions. The extracts of the species Virola sebifera; Arrabidaea chica; Gaylussacia brasiliensis and Anniba rosaeodora (Lin 3) exhibited antiviral activity for aMPV after treatment. The other extracts showed no significant antiviral activity for any of these viral species. The antiviral test of this study may still be used as screening for other species in search for substances with medicinal potential. The varied action activities of the extracts suggest that the occurrence of distinct mechanism of action between the viruses evaluated Mestrado Microbiologia Mestre em Genética e Biologia Molecular |
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