Estudo experimental em camundongos e aves comerciais com isolado de pombo do vírus da bronquite infecciosa (IBV) = Experimental study in mice and poultry with isolated from pigeon infectious bronchitis virus (IBV)
| Autor: | Martini, Matheus Cavalheiro, 1983 |
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| Rok vydání: | 2014 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Repositório Institucional da UnicampUniversidade Estadual de CampinasUNICAMP. |
| Druh dokumentu: | Doctoral Thesis |
| Popis: | Orientadores: Clarice Weis Arns, Helena Lage Ferreira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Made available in DSpace on 2018-08-26T04:15:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martini_MatheusCavalheiro_D.pdf: 16763908 bytes, checksum: 65c4aed6451181f383a10560fce87e51 (MD5) Previous issue date: 2014 O vírus da Bronquite Infecciosa (VBI), pertencente à família Coronaviridae, é um importante patógeno à sanidade e fatores econômicos da produção avícola no Brasil e no mundo. O VBI possui múltiplos sorotipos e o frequente surgimento de novas variantes é um dos principais problemas relacionados a este vírus. Este trabalho tem como objetivo a investigação experimental da patogênese de um isolado de pombo (Columba/Brazil/2007/Unicamp/67T), caracterizado molecularmente pelo gene S1 como VBI sorotipo Massachusetts, e seus efeitos in vivo, em galinhas e camundongos. O presente estudo foi dividido em duas partes, na primeira um grupo de aves "specific pathogen free" (SPF) foi inoculado pela via óculo-nasal com a amostra viral proveniente de pombo. Os animais, de um dia de vida, foram sacrificados nos dias 2, 4, 5, 7, 9, 11, 14, 21, 28, 35 e 42 dias pós-inoculação (dpi). Foram coletados suabes de traqueia, seio nasal e cloaca, além de órgãos como pulmão, íleo, pró-ventrículo (coletado entre 7 e 21 dpi), rim, tonsilas cecais (coletada a partir de 4dpi) e testículos (coletado a partir de 5 dpi). Sinais clínicos respiratórios como espirros, estertores, corrimento nasal, além de letargia, diarreia e perda de coordenação foram observados principalmente no 5dpi. A inibição da atividade ciliar ocorreu concomitantemente ao pico de sinais clínicos das aves. Foi analisado tropismo tecidual, através da quantidade de RNA viral detectado, pelo trato digestório. Os maiores títulos de RNA viral foram detectados na tonsila cecal, seguida pelo íleo (ambos no 5dpi) e cloaca (no 2dpi). Além disso, houve detecção de RNA viral no rim e trato respiratório, com maior título de RNA viral na traqueia. Os órgãos que apresentaram maiores danos teciduais através do exame histopatológico foram o rim, íleo e traqueia (todos no 5dpi). Por fim, as aves inoculadas com a amostra do VBI oriundo de pombo produziram anticorpos entre os dias 14 e 21dpi, detectados no soro destes animais através do ELISA. Na segunda parte do trabalho, a capacidade de replicação de diferentes variantes do VBI em camundongos foi avaliada. Para tanto, camundongos das linhagens Balb/C e A/J foram inoculados pela via nasal com duas amostras do sorotipo Massachussets (Mass) e com a variante brasileira (BR-I), e sacrificados no 3, 10 e 14 dpi. Não foram observados sinais clínicos nem lesões macroscópicas graves. O RNA viral foi detectado em todos os órgãos coletados, sendo os principais órgãos de replicação o seio nasal e pulmão (no 3dpi) para os camundongos da linhagem A/J e pulmão e duodeno (ambos no 3dpi) na linhagem de camundongos Balb/C, nos quais os títulos virais detectados foram mais altos. Pneumonia intersticial, edema e infiltrado mononuclear foram as principais alterações histopatológicas observadas no 3dpi em camundongos inoculados com as diferentes variantes. A presença da nucleoproteína viral, pela imunohistoquímica, foi detectada no duodeno, traqueia e pulmão de camundongos no 3dpi nas duas linhagens de camundongos. Os anticorpos contra o coronavírus aviário foram detectados somente no 3dpi. Assim, os resultados do presente estudo demonstraram que a variante Massachussets, com origem de pombo, causa a doença clínica em aves comerciais não vacinadas e pode replicar em modelo mamífero por um curto período de tempo, ressaltando a importância da vacinação e o papel potencial dos roedores como possível reservatório e carreador do vírus Infectious bronchitis virus (IBV) belonging to the family Coronaviridae is an important pathogen to sanity and economics of poultry production in Brazil and worldwide. The VBI has multiple serotypes and the frequent emergence of new variants is one of the main problems related to this virus. This work aims to experimentally investigate the pathogenesis of pigeon sample (Columba/Brazil/2007/Unicamp/67T), molecularly characterized by S1 gene as IBV Massachusetts serotype, and its effects in vivo in chickens and mice. This study was divided into two parts. In the first part, a group of birds "specific pathogen free" (SPF) was inoculated by oculo-nasal route with the viral sample from pigeon. The animals with one-day-old, were sacrificed on 2, 4, 5, 7, 9, 11, 14, 21, 28, 35 and 42 days post-inoculation (dpi). Tracheal swabs, nasal sinus and cloaca were collected, and organs such as lung, ileum, pro-ventricular (collected between 7 and 21dpi), kidney, caecal tonsils (collected from 4dpi) and testes (collected from 5 dpi). Clinical signs such as sneezing, rales, nasal discharge, lethargy, diarrhea, and loss of coordination were observed mainly in the 5dpi. Inhibition of ciliary activity occurred concomitantly with the peak of clinical signs of birds. Tissue tropism was analyzed by the amount of viral RNA detected by the gastrointestinal tract. The higher titers of viral RNA were detected in the cecal tonsil, followed by the ileum (both in 5dpi) and cloaca (in 2dpi). In addition, viral RNA was detected in the kidney and respiratory tract, with highest titer of viral RNA in the trachea. The organs that showed severe tissue damage by histopathology were the kidney, ileum and trachea (all in 5dpi). Finally, the birds inoculated with the sample originated from IBV Pigeon produced antibodies between 14 and 21dpi, detected in the serum of these animals by ELISA. In the second part, the replication capacity of different variants of IBV in mice was evaluated. For this, mice of strains BALB/C and A/J were inoculated intranasally with two strains of Massachusetts (Mass) serotype and the Brazilian variant (BR-I), and sacrificed at 3, 10 and 14 dpi. No clinical signs or severe macroscopic lesions were observed. The viral RNA was detected in all organs collected, higher tittles were detected on sinus and lung (in 3dpi) for mice of strain A/J and on lung and duodenum (both in 3dpi) in the line of Balb/C; in this line the viral titles were higher than the strain A/J. Interstitial pneumonia, edema and mononuclear cell infiltration were the main histopathological changes observed in 3dpi in inoculated mice with different variants. The presence of viral nucleoprotein, immunohistochemistry was detected in the duodenum, trachea and lungs of mice in 3dpi in both mice strains. Antibodies against avian coronaviruses have been detected only in 3dpi. Thus, the results of this study demonstrate that the Massachusetts variant, originating from pigeon, cause clinical disease in commercial poultry unvaccinated and can replicate in mammalian model for a short period of time, emphasizing the importance of vaccination and the potential role of rodents as possible reservoir and the carrier virus Doutorado Microbiologia Doutora em Genética e Biologia Molecular |
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