Criopreservação de espermatozoides humanos selecionados pela tecnica de 'swin-up' : efeitos sobre a vitalidade, motilidade e integridade acrossomica apos o descongelamento
| Autor: | Esteves, Sandro Cassiano |
|---|---|
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 1998 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Repositório Institucional da UnicampUniversidade Estadual de CampinasUNICAMP. |
| Druh dokumentu: | masterThesis |
| Popis: | Orientador: Fernandes Denardi Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Made available in DSpace on 2018-07-24T05:44:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Esteves_SandroCassiano_M.pdf: 4359044 bytes, checksum: ef86ac776f66f2a4dfc46a48740ef92b (MD5) Previous issue date: 1998 Apesar do aperfeiçoamento das técnicas de criopreservação, o potencial fértil do sêmen humano criopreservado ainda é insatisfatório. Por outro lado, o processamento do sêmen constitui etapa fundamental nas técnicas de reprodução assistida. A técnica de "swim-up" é o método mais freqüentemente utilizado para o processamento do sêmen humano, pois permite a seleção de um grande número de espermatozóides móveis. O objetivo do presente estudo foi avaliar se a seleção de espermatozóides humanos pela técnica de "swim-up", antes da criopreservação, é capaz de minimizar a perda de motilidade, vitalidade e integridade acrossômica, decorrentes do processo de congelamento-descongelamento. Visa-se, dessa forma, propiciar, após o descongelamento, a recuperação de espermatozóides com potencial fértil superior àqueles não-selecionados. Amostras de sêmen de 15 indivíduos com fertilidade comprovada foram obtidas por masturbação, após 2 a 3 dias de abstinência sexual, e divididas em duas alíquotas de volumes iguais. A primeira delas não recebeu qualquer tratamento (não¬selecionada), enquanto que a segunda foi processada pela técnica de "swim-up" (selecionada). Ambas as alíquotas foram, então, criopreservadas através da técnica de vapor de nitrogênio líquido. A motilidade percentual, e os parâmetros da motilidade espermática foram avaliados por um analisador computadorizado. A integridade acrossômica foi analisada pela técnica de fluorescência, empregando-se a lecitina do amendoim (FITC-PNA), em associação com o corte supravital bis-benzimida (Hoescht¬33258), para avaliação da vitalidade espermática. Cada alíquota foi avaliada quanto à motilidade percentual, parâmetros da motilidade espermática, vitalidade e integridade acrossômica, antes e depois da criopreservação. O teste "t" de Student para amostras pareadas, com nível de significância de 0,05, foi utilizado para determinar diferenças estatísticas na motilidade espermática, vitalidade e integridade acrossômica, bem como para avaliar as diferenças pecentuais destes parâmetros de antes para depois da criopreservação. Os espermatozóides selecionados pela técnica de "swim-up" apresentaram, antes da criopreservação, valores médios de vitalidade, motilidade percentual e parâmetros da motilidade espermática, com exceção da linearidade, significativamente superiores aos dos espermatozóides não-selecionados. Entretanto, não houve diferença estatística no percentual de espermatozóides com acrossomos intactos entre as amostras não-selecionadas e selecionadas. Após a criopreservação, observou-se, em ambas as amostras, queda significativa da motilidade percentual, parâmetros da motilidade espermática, vitalidade e integridade acrossômica. Contudo, não houve diferença estatística na variação percentual da motilidade e vitalidade espermática, de antes para depois da criopreservação, entre as amostras não-selecionadas e selecionadas pela técnica de "swim-up". Em contrapartida, a integridade acrossômica dos espermatozóides criopreservados foi significativamente superior nas amostras selecionadas por esta técnica. Além disso, a queda percentual da integridade acrossômica, depois da criopreservação, foi significativamente menor nas amostras selecionadas pela técnica de "swim-up". Embora a técnica de "swim-up" tenha selecionado a subpopulação de espermatozóides qualitativamente superior, antes da criopreservação, tal tratamento não foi eficaz para minimizar a perda de motilidade e vitalidade, decorrentes do processo de criopreservação. Entretanto, o processamento do sêmen pela técnica de "swim-up", anteriormente à criopreservação, permitiu a recuperação de um percentual maior de espermatozóides com acrossomos intactos, reduzindo a perda de integridade acrossômica, causada pelo processo de criopreservação. Portanto, a seleção de espermatozóides pela técnica de "swim-up", previamente à criopreservação, é benéfica para aumentar o potencial fértil dos espermatozóides criopreservados Despite of the developments in freezing techniques, the fertilizing potential of human spermatozoa after thawing remains poor. Sperm processing, on the other hand, is a fundamental step in assisted reproductive techniques. Swim-up is the most frequent used procedure for processing of human spermatozoa, as it selects a high number of motile spermatozoa. The aim of this study was to evaluate whether sperm selection by the swim¬up technique before freezing can minimize loss of motility, viability and acrosome integrity due to the freezing-thaw process, thus yielding post-thaw recovery of spermatozoa with higher fertilizing potential than unprocessed ones. Semen specimens from 15 healthy individuaIs with proven fertility were obtained by masturbation after 2 to 3 days of abstinence, and divided into two equal aliquots. The first aliquot received no treatment (unprocessed) and the second was processed by the swim-up technique (processed). Both aliquots were then cryopreserved by the liquid nitrogen vapor method. Percent motility and sperm motion characteristics in unprocessed and processed specimens were analyzed by computer-assisted semen analysis. Sperm viability was evaluated by a supra-vital dye bis-benzimide (Hoescht-33258). The acrosome integrity were assessed by fluorescein iso-thiocyanate conjugated peanut lectin (FITC-PNA). Each aliquot was evaluated for percent motility, motion characteristics, sperm viability and acrosome integrity either before freezing and afieI' thawing. The paired Student's "t" test was used to test for statistical differences in sperm motility, viability and acrosome integrity either before freezing and after thawing, as well as for percent change' on these parameters due to the cryopreservation processo A alpha leveI of 0.05 was considered significant. Compared with the unprocessed samples, the spermatozoa selected by the swim-up technique exhibited better percent motility, viability and all motion parameters, except linearity, before freezing. However, the frequency of spermatozoa exhibiting intact acrosomes was not different between unprocessed and swim-up specimens. After thawing, a significant impairment was observed in percent motility, motion characteristics, sperm viability and acrosome integrity in both unprocessed and swim-up specimens. Nevertheless, there was no difference in the percent change of sperm motility and viability from before freezing to after thawing between unprocessed and swim-up groups. However, acrosome integrity was significant1y higher in swim-up se1ected spermatozoa after thawing. In addition, the percent decrease in acrosome integrity from before freezing to after thawing was significant1y 10wer in swim-up se1ected specimens. Although sperm processing by the swim-up technique se1ected a better qua1ity sperm popu1ation before freezing, this treatment have not been ab1e to minimize the 10ss in moti1ity and viabi1ity due to the freeze-thaw processo However, pre-freeze se1ection of spermatozoa by the swim-up technique yie1ded a higher frequency of spermatozoa with intact acrosomes and reduced the 10ss in acrosome integrity due to the cryopreservation processo Therefore, pre-freeze sperm se1ection by swim-up may increase the ferti1izing potentia1 of spermatozoa after cryopreservation Mestrado Cirurgia Mestre em Cirurgia |
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