Análise proteômica do líquido folicular de vacas gestantes

Autor: Moura, Diego Souza [UNESP]
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2016
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UNESPUniversidade Estadual PaulistaUNESP.
Druh dokumentu: masterThesis
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No ciclo estral das vacas ocorre uma série de eventos que se repetem até o impedimento da luteólise, pela presença do embrião no útero, que provoca alterações no organismo materno de ordens hormonais, anatômicas e comportamentais. Apesar disso, a colheita de oócitos em vacas gestantes é uma alternativa para a produção in vitro de embriões. No entanto, em vista do perfil hormonal durante a gestação, os fatores envolvidos no desenvolvimento folicular podem ser comprometidos. Em vista disso, este estudo objetivou descrever o perfil proteico do líquido folicular de vacas gestantes. Foram colhidos ovários de 36 vacas gestantes em terço inicial de gestação. O líquido folicular foi puncionado e o diâmetro de cada folículo foi mensurado pela ultrassonografia, sendo classificados em três categorias ≤6,4mm, 6,5mm a 8,9mm e ≥9. Após duas centrifugações para remoção dos componentes celulares, as proteínas totais foram mensuradas e a eletroforese unidimensional realizada sob condições desnaturantes e redutoras. As bandas foram recortadas e a digestão in gel realizada objetivando a espectrometria de massas. A concentração de estrógeno e progesterona foi mensurada no líquido folicular para determinar a viabilidade dos folículos. Foram encontradas 46 bandas de proteínas na eletroforese em 67 amostras de líquido folicular. A média da concentração ± desvio padrão da progesterona foi de 71,32 ± 80,06 ng/mL e estrógeno de 27,57 ± 30,62 ng/mL, considerando todos os folículos. Houve expressão diferenciada de proteínas nas diferentes categorias de folículos. Na espectrometria de massas foram encontradas diversas proteínas, sendo as principais apolipoproteina, angiotensinogênio, heat shock protein, glutationa e suas isoformas.
Estorus cycle of cows has a series of events that are repeated until the luteolysis impediment, because the presence of embryo in the uterus, which causes hormonal, anatomical and behavioral orders, changes in the maternal organism. Nevertheless, the ovum pick-up in pregnant cows is an alternative to the in vitro production of embryos. However, in view of the hormonal profile during pregnancy, the factors involved in follicular development may be impaired. Thus, this study aimed to describe the protein profile of follicular fluid from pregnant cows. Ovaries were collected from 36 pregnant cows with gestational age 1-4 months. Follicular fluid was punctured and the diameter of each follicle was measured by ultrasonography, classified into three categories ≤6.4mm, 6.5 to 8.9 mm and ≥9. After two centrifugation to remove the cellular components, total protein were measurement and unidimensional electrophoresis was performed under denaturing and reducing conditions. The bands were cut and digestion in gel was carried out aiming to mass spectrometry. The concentration of estrogen and progesterone in follicular fluid was measured to determine the viability of follicles. We found 46 protein bands in electrophoresis in 67 follicular fluid samples. The mean ± standard deviation of progesterone concentration was 71.32 ± 80.06 considering all follicles. There was differential expression of proteins in different categories of follicles. In mass spectrometry were found many proteins, being main apolipoprotein, angiotensinogen, heat shock protein, glutathione and their isoforms.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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