Efeitos de agentes desidratantes sobre fibras de cromatina e cromatossoma reconstituídos in vitro
| Autor: | Martin, Fonkoua |
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| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2015 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Repositório Institucional da UnBUniversidade de BrasíliaUNB. |
| Druh dokumentu: | Doctoral Thesis |
| Popis: | Tese (doutorado)Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de pós-graduação em Ciências da Saúde, 2015. Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2016-02-29T14:34:43Z No. of bitstreams: 1 2015_FonkouaMartin_Parcial.pdf: 121564 bytes, checksum: 42680feed538c086a4126ab94233299e (MD5) Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2016-02-29T15:14:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_FonkouaMartin_Parcial.pdf: 121564 bytes, checksum: 42680feed538c086a4126ab94233299e (MD5) Made available in DSpace on 2016-02-29T15:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_FonkouaMartin_Parcial.pdf: 121564 bytes, checksum: 42680feed538c086a4126ab94233299e (MD5) O DNA em seres eucarióticos é organizado na forma de cromatina, sendo esta a principal responsável pela regulação de diversas atividades vitais para célula, como a transcrição e manutenção do genoma. A cromatina é um complexo formado por unidades repetitivas de nucleossomos e pode se apresentar na forma aberta (10nm-permissiva) ou fechada (30nm- repressiva). Está evidente que a dinâmica de modulação da estrutura da cromatina determina a resposta transcricional e consequentemente o desfecho clínico. Desta forma, com objetivo de se analisar a dinâmica da cromatina, (i) procuramos estabelecer o desenvolvimento de uma metodologia in vitro para o estudo estrutural da cromatina. Em seguida, (ii) objetivamos estudar a ação do etanol, um agente desidratante, sobre a formação do mononucleossomo e de longas fibras de cromatina reconstituídos in vitro e (iii) estabelecer a concentração ideal de colesterol para induzir a formação do cromatossomo, complexo nucleossomo e linker histona (H5). Observamos, por ensaios bioquímicos que o etanol aumenta a estabilidade do mononucleossomo e auxilia a formação de fibras de cromatina de 10nm. Contudo, não observamos nenhum efeito do etanol sobre a formação da fibra de 30nm reconstituída in vitro. Além disso, determinamos a concentração mínima e máxima de colesterol capaz de induzir a formação do cromatossomo. Esses resultados sugerem que o etanol e colesterol possam auxiliar os estudos estruturais da cromatina reconstituída in vitro e que a desidratação da cromatina, através destes agentes, possa afetar a dinâmica da cromatina. Ainda desconhecemos os efeitos fisiológicos destes achados, mas nossos resultados apontam para um novo campo de pesquisa ainda inexplorado, onde pequenas moléculas ligantes de nucleosssomo afetam a estrutura da cromatina. ___ ABSTRACT The DNA in eukaryotic beings is organized in the form of chromatin, which is one of the main molecule responsible for the regulation of vital activities in the cell, such as transcriptional process and genome maintenance. Chromatin is a complex formed by a repetitive units call nucleosomes .It can be present in an open (10nm-permissive) or closed (30nm-repression) structure. It is now evident that the transcriptional response is related to the chromatin structure and dynamic and this determines clinical outcome. In this way, in order to analyse the dynamics of chromatin, we first seek to establish an in vitro methodology for the structural study of chromatin. Therefore, the objectives were to study the action of ethanol, a dehydrating agent, on the formation of mononucleosome and long fibres of chromatin reconstituted in vitro and; II) study the action of cholesterol on the formation of chromatosome, a nucleosome and linker histone (H5) complex. We observe, through biochemical assays that ethanol increases the stability of the mononucleossome and helps in the formation of 10nm chromatin fibres. However, we have noticed no effect of ethanol on the formation of the 30nm fibre reconstituted in vitro. Moreover, we observe that the cholesterol induces the formation of chromatosome. These results suggest that ethanol and cholesterol may help in the structural studies of chromatin reconstituted in vitro and that dehydration of chromatin, through these agents, can affect his dynamics .We still don't know about the physiological effects of these findings, however, our results pointed out a new research field still unexplored where small molecules are able to bind to mononucleosome and affect the chromatin structure. |
| Databáze: | Networked Digital Library of Theses & Dissertations |
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