Caracteriza??o e quantifica??o de marcadores qu?micos do extrato hidroetan?lico das folhas de Kalanchoe brasiliensis Cambess

Autor: Costa, Anne Caroline de Oliveira
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2014
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFRNUniversidade Federal do Rio Grande do NorteUFRN.
Druh dokumentu: masterThesis
Popis: Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnneCOC_DISSERT.pdf: 1977864 bytes, checksum: 512fa415d2a3e86643a5d0929e22bccf (MD5) Previous issue date: 2012-06-05
Kalanchoe brasiliensis Cambess (Crassulaceae), commonly known as sai?o, coirama branca, folha grossa, is originally from Brazil and commonly found in S?o Paulo to Bahia, mainly in the coastal zone. Regarding of biological activities, most preclinical studies were found in the literature, mainly about the anti-inflammatory activity of extracts obtained from leaves and / or aerial parts of K. brasiliensis. As regards the chemical constitution, it has been reported mainly the presence of flavonoids in the leaves of the species, but until this moment did not knows which are the active compounds. Although it is a species widely used in traditional medicine in Brazil, there is no monograph about the quality parameters of the plant drug. In this context, this study aims to characterize and quantify the chemical markers of hydroethanolic extract (HE) from the leaves of K. brasiliensis, which can be used in quality control of plant drug and derivatives obtained from this species. The methodology was divided into two parts: i. Phytochemical study: to fractionate, isolate and characterizate of the chemical (s) marker (s) of the HE from the leaves of K. brasiliensis; ii. To Developed validate of analytical method by High Performance Liquid Chromatography (HPLC)-diode array detector (DAD) to quantify the chemical (s) marker (s) of the EH. i. The EH 50% was prepared by turbo extraction method. It was then submitted to liquid-liquid partition, obtaining dichloromethane, n-butanol and ethyl acetate (AcOEt) fractions. The AcOEt fraction was selected to continue the fractionation process, because it has a chemical profile rich in flavonoids. The acOEt fraction was submitted to column chromatography using different systems for obtaining the compound Kb1. To identify this compound, it was submitted to UV analysis ii. For quantitative analysis, the EH was analyzed by HPLC, using different methods. After selecting the most appropriate method, which showed satisfactory resolution and symmetrical peaks, it was validated according to parameters in the RE 899/2003. As result, it was obtained from the AcOEt fraction the compound Kb1 (2.7 mg). Until this moment, the basic nucleus was characterized by UV analysis using shift reagents. The partial chemical structure of the compound Kb1 was identified as a flavonol, containing hydroxyls in 3, 4 position (ring A), 5 and 7 free (ring B) and a replacement of the C3 hydroxyl by a sugar. As the analysis were performed in the HPLC coupled to a DAD, we observed that the UV spectrum of the major peaks of EH from K. brasiliensis shown similar UV spectrum. According to the literature, it has been reported the presence of patuletin glycosydes derivatives in the leaves of this species. Therefore, it is suggested that the compound Kb1 is glycosylated patuletin derivative. Probably the sugar (s) unit(s) are linked in the C3 in the C ring.. Regarding the development of HPLC analytical method, the system used consists of phase A: water: formic acid (99,7:0,3, v / v) and phase B: methanol: formic acid (99,7:0,3, v / v), elution gradient of 40% B - 58% B in 50 minutes, ccolumn (Hichrom ?) C18 (250x4, 0 mm, 5 ?m), flow rate 0.8 mL / min, UV detection at 370 nm, temperature 25 ? C. In the analysis performed with the co-injection of thecompound Kb1 + HE of K. brasiliensis was observed that it is one of the major compounds with a retention time of 12.47 minutes and had a content of 15.3% in EH of leaves from K. brasiliensis. The method proved to be linear, precise, accurate and reproducible. According to these results, it was observed that compound Kb1 can be used as a chemical marker of EH from leaves of K. brasiliensis, to assist in quality control of drug plant and its derivatives
Kalanchoe brasiliensis Cambess (Crassulaceae), conhecida popularmente como sai?o, coirama branca e folha grossa, ? origin?ria do Brasil e comumente encontrada de S?o Paulo at? a Bahia, principalmente na zona litor?nea. Quanto ? atividade microbiol?gica, estudos pr?-cl?nicos foram realizados no sentido de investigar a atividade antiinflamat?ria, para os extratos obtidos a partir folhas e/ou partes ?reas de K. brasiliensis. Em rela??o ? constitui??o qu?mica, h? relatos principalmente da presen?a de flavonoides nas folhas da esp?cie. Embora seja uma esp?cie utilizada amplamente na medicina tradicional no Brasil, n?o h? monografia que especifique os par?metros de qualidade da droga vegetal. Dentro deste contexto, o presente trabalho tem como objetivo caracterizar e a quantificar os marcadores qu?micos do extrato hidroetan?lico (EH) das folhas de K. brasiliensis, que possam ser utilizados no controle de qualidade de derivados obtidos a partir dessa esp?cie. A metodologia do estudo foi dividida em duas partes: i. Estudo fitoqu?mico: fracionamento, isolamento e caracteriza??o de marcador(es) qu?mico(s) do extrato hidroetan?lico das folhas de K. brasiliensis; ii.Desenvolvimento e valida??o de metodologia anal?tica por Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE) para quantificar (o)s marcador(es) qu?mico(s) do EH. i. O EH 50% foi obtido pelo m?todo de turboextra??o. Em seguida foi submetido a uma parti??o l?quido-l?quido, obtendo-se as fra??es diclorometano, n-butanol e acetato de etila (FAcOEt). A fra??o acetato de etila foi selecionada para dar continuidade ao fracionamento, e por apresentar um perfil qu?mico rico em flavonoides, uma vez que esses metab?litos parecem estar relacionados ? atividade farmacol?gica. ii. Para a an?lise quantitativa, o EH foi analisado por CLAE, utilizando diferentes m?todos. Ap?s selecionado o m?todo mais adequado, que apresentou picos sim?tricos e resolu??o satisfat?ria, foi realizada a valida??o segundo par?metros da RE No 899/2003. Como resultados, foi obtido a partir da fra??o acetato de etila o composto Kb1 (2,7mg). Neste composto, foi caracterizado o n?cleo b?sico flavono?dico por an?lise por UV utilizando reagentes de deslocamento. O composto Kb1 foi identificado como um flavonol, com hidroxilas em 3, 4 (anel B) e 5 e 7 livres (anel A), al?m de uma hidroxila substitu?da em C3. Como foi utilizado a CLAE acoplada a um detector de arranjo de diodos, foi poss?vel observar que os espectros UV dos picos majorit?rios do EH de K. brasiliensis s?o similares. Em estudos anteriores foi descrita a presen?a de derivados glicosilados da patuletina nas folhas dessa esp?cie. Portanto, sugere-se que Kb1 seja um derivado glicosilado na posi??o C-3 da patuletina. Quanto ao desenvolvimento anal?tico por CLAE, o sistema utilizado foi constitu?do de fase A: ?gua:?cido f?rmico (99,7:0,3, v/v) e fase B: metanol:?cido f?rmico (99,7:0,3, v/v) em elui??o gradiente de 40%B - 58%B em 50 minutos, coluna cromatogr?fica (Hichrom) C18 (250x4,0mm, 5?m), fluxo 0,8 mL/min, detec??o em UV a 370 nm, temperatura de 25oC. Por meio de co-inje??o do padr?o + extrato foi observado que Kb1 trata-se de um dos compostos majorit?rios, com tempo de reten??o de 12,47 minutos e apresentou um teor de 15,3% no EH de K. brasiliensis O m?todo apresentou-se linear, preciso, exato e reprodut?vel. De acordo com os resultados obtidos, foi observado que Kb1 pode ser utilizado como marcador qu?mico do EH das folhas de K. brasiliensis, para auxiliar no controle de qualidade da droga vegetal e seus derivados
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