Análise do perfil de expressão de genes da família Hsp70 de Trichoderma asperellum (TR356) durante o micoparasitismo e estresses abióticos

Autor: Rodrigues, Thuana Marcolino Mota
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2018
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFGUniversidade Federal de GoiásUFG.
Druh dokumentu: masterThesis
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
The genus Trichoderma ssp, is today the group of species most commonly studied and used to act in agriculture as biological control against phytopathogens. Its rapid mycelial growth, associated with high production of conidia, synthesis of several antibiotics and ability to live in different forms (saprotrophic, symbiont or mycoparasite) are characteristics that make it attractive for this purpose. The relation of mycoparasitism, as well as oscillations in environmental conditions, naturally causes cell stress and consequent response to the stressing agent. This response occurs through changes in cellular metabolism, activating its defense mechanisms that include the performance of heat shock proteins (Hsp). The objective of this work was to identify the Hsp70 family of Trichoderma asperellum and to analyze the expression of three genes encoding proteins of this family during mycoparasitism and in situations of thermal and ethanol stress. The identification of the T. asperellum Hsp70 proteins was possible from the database analysis (JGI) of the T. asperellum genome, available, but not annotated. We identified a total of 12 proteins from the Hsp70 family in T. asperellum, three of which were selected for gene expression assays. Paired cultivation was carried out between T. asperellum and phytopathogens: Sclerotinia sclerotiorum and Fusarium oxysporum in three phases of mycoparasitism: pre-contact, contact and post-contact. We verified that the expression of Tahsp70a, Tahsp70b and Tahsp70c genes varies according to the phases of the mycoparasitism and the phytopathogen studied. Expression of hsp70 under thermal stress was evaluated at the 38 °C condition for 30 minutes, 1, 2 and 4 hours and at the conditions of 4, 10 and 32 °C for 1 hour. Ethanol stress was also performed for 1 hour. During the thermal stress Tahsp70a and Tahsp70b presented higher induction and the Tahsp70c gene had its highest induction in the cold shock at 4 °C. In ethanol stress the analyzed genes did not present significant expression.
O gênero Trichoderma ssp, constitui hoje o grupo de espécies de fungos mais estudadas e comumente usadas para atuar na agricultura como controle biológico contra fitopatógenos. Seu rápido crescimento micelial, associado a alta produção de conídios, síntese de diversos antibióticos e capacidade de viver de diversas formas (saprotrófica, simbionte ou micoparasita) são características que o tornam atraente para esse fim. A relação de micoparasitismo, bem como as oscilações nas condições ambientais, geram naturalmente estresse sobre as células desse fungo e consequente resposta ante o agente estressante. Esta resposta ocorre através de mudanças no metabolismo celular, ativando seus mecanismos de defesa que incluem o desempenho de proteínas de choque térmico (Hsp). O objetivo deste trabalho foi identificar a família Hsp70 de Trichoderma asperellum e analisar a expressão de três genes codificando proteínas desta família durante o micoparasitismo e em situações de estresse térmico e estresse por etanol. A identificação das proteínas Hsp70 de T. asperellum foi possível a partir de análises em banco de dados (JGI) do genoma de Trichoderma asperellum, disponível, mas não anotado. Identificamos no total 12 proteínas da família Hsp70 em T. asperellum, sendo três selecionadas para ensaios de expressão gênica. Foi realizado cultivo pareado entre T. asperellum e os fitopatógenos: Sclerotinia sclerotiorum e Fusarium oxysporum em três fases do micoparasitismo: pré-contato, contato e pós-contato. Verificamos que a expressão dos genes Tahsp70a, Tahsp70b e Tahsp70c varia de acordo com as fases do micoparasitismo e do fitopatógeno estudado. A expressão dos genes hsp70 em estresse térmico, foi avaliada na condição de 38 °C durante 30 minutos, 1, 2 e 4 horas e nas condições de 4, 10 e 32 °C por 1 hora, O estresse por etanol também foi realizado por 1 hora. Durante o estresse térmico, Tahsp70a e Tahsp70b apresentaram maior indução sendo que o gene Tahsp70c teve sua maior indução no choque frio à 4 °C. No estresse por etanol os genes analisados não apresentaram expressão significativa.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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