Detecção de genes de virulência de Staphylococcus aureus identificados por PCR em amostras de leite de vacas com mastite clínica ou subclínica

Autor: Freitas, Fernanda Antunha de
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2014
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFGUniversidade Federal de GoiásUFG.
Druh dokumentu: masterThesis
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG
Staphylococcus aureus can produce a wide variety of virulence factors secreted or associated with bacterial wall, among them the exotoxins. The pathogenicity of S. aureus to the bovine udder is not quite clarified, but the staphylococcal exotoxins and their combinations may play a role in the pathogenic potential of the microorganism. Considering that knowing the virulence factors of S. aureus provides an important information of the establishment of effective control strategies of intramammary infections we aimed to detect the DNA of S. aureus isolates from milk of cows with clinical or subclinical mastitis and identify genes encoding bacterial exotoxins and superantigens. For this purpose, in the present study were used 55 isolates of S. aureus, obtained from milk samples from cows with clinical or subclinical mastitis. The isolates were electronically identified using the methodology described by Vitek 2® device manual. Genomic DNA extrac ted using the High Pure PCR Template Preparation Kit. The laboratory analysis for detection of species and genes encoding the exotoxins were performed at the Laboratório de Especialidades Biológicas of Centro de Pesquisa em Alimentos of Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás (LEB/CPA/EVZ/UFG). The gene eta was detected in 85,5% of the isolates, the pvl gene in 63,6% and the tst gene in 14,5%. The etb gene was not isolated. It was verified that the Real Time PCR technique for detection of sodA gene proved to be effective in identifying the species S. aureus, and may become an important tool in the diagnosis of the bovine mastits causing microorganisms. The isolates of S. aureus mastitis harbor genes exotoxins, such as pvl, tst and eta, which the last one may play an important role in the pathogenesis of bovine mastitis since the majority of the isolates showed to be positive for its presence.
Staphylococcus aureus é capaz de produzir uma grande variedade de fatores de virulência associados à parede bacteriana ou secretados, entre eles as exotoxinas. Sua patogenicidade para o úbere bovino não está completamente elucidada, mas as exotoxinas estafilocócicas e suas combinações podem desempenhar papel no potencial patogênico do microrganismo. Levando em consideração que o conhecimento dos fatores de virulência de S. aureus fornece informações importantes para o estabelecimento de estratégias efetivas de controle de infecções intramamárias, objetivou-se detectar o DNA de S. aureus isolados de leite provenientes de vacas com mastite clínica ou subclínica e identificar genes codificadores de superantígenos bacterianos e exotoxinas. Para tanto, no presente estudo foram utilizados 55 isolados de S. aureus, obtidos a partir de amostras de leite provenientes de vacas com mastite clínica ou subclínica. Os isolados foram identificados eletrônicamente a partir da metodologia descrita pelo manual do equipamento Vitek 2 ®. O DNA genômico extraído utilizando o High Pure PCR Template Preparation Kit. As análises laboratoriais de detecção da espécie e dos genes codificadores das exotoxinas foram realizadas no Laboratório de Especialidades Biológicas do Centro de Pesquisa em Alimentos da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás (LEB/CPA/EVZ/UFG). Detectou-se o gene eta em 85,5% dos isolados, o gene pvl em 63,6% e o gene tst em 14,5%. O gene etb não foi isolados. Verificou-se que a técnica de PCR em tempo real para detecção do gene sodA, mostrou-se eficaz na identificação da espécie S. aureus, podendo se tornar uma ferramenta importante no diagnóstico dos microrganismos causadores de mastites bovinas. Os isolados de S. aureus de mastite carream genes de exotoxinas, como pvl, tst e eta, sendo que este último pode ter um papel importante na patogênese de mastites bovinas, visto que a maioria dos isolados se mostraram positivos para a sua presença.
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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