Prospecção de substâncias com atividade antagonista á Candida albicans produzida por bactéria endofítica da região amazônica

Autor: Souza, Ivanete Ferreira de
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2016
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAMUniversidade Federal do AmazonasUFAM.
Druh dokumentu: masterThesis
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The Amazon Biodiversity symbolize Is a great potential to Discovery of new bacterial straight producer of active biomolecules with importance biotechnological as antimycotics that can be producing by endophytic microorganisms whose the object may be the yeast Candida albicans. This yeast is present in the human body as commensally, being able to cause serious infections, especially in individual immune depressed by diseases as cancer, AIDS and diabetes. It is resistant to antifungal available actually. This way, the object this study was find, from the Amazon bacteria, a bacteria able of produce actives molecules against the C. Albicans yeast, with a purpose to make the production of a active extract that make possible to fractionate and purify the active substance. In the search this anti-candida substance after a analysis of bacteria from different habitats as Waters of the Rio Negro and Solimões and strains derived from endophytic bacteria work collection of Applied Genetics Laboratory Health and Biotechnology of UEA, initially had their potential antimicrobial tested against different pathogenic organisms (Mycobacterium smegmatis, Pseudomlmonasae ruginosa and Staphylococcus aureaus) by cross streaking. The potentials microorganisms were selected and identified by morphology and for sequences of the 16S rDNA region. The growth was made in two different culture media to production of crud extract. The verification the anti-candida action was by diffusion tests in Agar and the quantification was through the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The extract produced was pré-purified by chromatography in open column and was applied thin layer chromatography (TLC) to check the fractions obtained. In total six endopthytic bacteria were selected because they had antimicrobial activity against at least one of pathogens tested, but only the bacteria 229 presented active against C. albicans being cultivate to produce of extract and possibility of identified of anti-candida substance. The culture media that showed better production of biomolecules was the ISP2, according to analysis of size of the halos from of the extract produced. The colony growth was identified as B. amyloliquefaciens and morphologically characterized as Gram positive bacilli The pré-purification resulted in two actives fractions as MIC of 0,25 and 0,5 ug.mL-1. This way, conclude that in Amazon is possible the identify of bacteria with pharmacological activities from which can be produce antimycotic molecules.
A Biodiversidade Amazônica representa um grande potencial para descoberta de novas linhagens bacterianas produtoras de biomoléculas ativas de importância biotecnológica, como os antimicóticos que podem ser produzidos por microrganismos endofíticos cujo o alvo pode ser a levedura Candida albicans. Esta levedura está presente no corpo humano de forma comensal, sendo capaz de ocasionar graves infecções, principalmente em individuos com o sistema imunológico debilitado por doenças como câncer, AIDS e diabetes. Ela apresenta resistência aos antifúngicos disponíveis na atualidade. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi encontrar, a partir de bactérias da Amazônia, uma bactéria capaz de produzir moléculas ativa contra a levedura C. albicans afim de fazer a produção de um extrato ativo que fosse possível fracionar e purificar a substância ativa. Na busca desta substância anti-candida, após a análise de bactérias de diversos habitats como águas dos Rios Negro e Solimões e de cepas oriundas de coleção de trabalho de bactérias endofiticas do Laboratório de Genética Aplicada a Sáude e a Biotecnologia da UEA tiveram inicialmente seu potencial antimicrobiano testado frente a diferentes microrganismos patogênicos (Micobacterium smegmatis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus) por estrias cruzadas. Os microrganismos com potencial foram selecionados e identificados por morfológia e pelas sequências da região 16S do rDNA. Fez-se o cultivo em dois meios de cultura diferentes para produção do extrato bruto. A verificação da ação anti-candida foi por testes de difusão em ágar e a quantificação desta através da Concentração Mínima Inibitória (CIM). O extrato produzido foi pré-purificado por cromatografia em coluna aberta e aplicou-se cromatografia em camada delgada (CCD) para acompanhamento das frações obtidas. Ao total seis bactérias endofíticas foram selecionadas por apresentarem atividade antimicrobiana contra ao menos um dos patógenos testados, porém, somente a bactéria 229 apresentou-se ativa contra C. albicans sendo cultivada para produção do extrato e tentativa de identificação da substância anti-candida. O meio de cultura que apresentou melhor produção da biomolécula foi o ISP2, conforme avaliação do tamanho dos halos a partir do extrato produzido. A colônia cultivada foi identificada como Bacillus amyloliquefaciens e caracterizada morfologicamente como bacilos Gram positivo. A pre-purificação resultou em duas frações ativas com CIM de 0,25 e 0,5 ug.mL-1. Conclui-se desta maneira que na Amazônia é possível a identificação de bactérias com atividades farmacológicas a partir das quais pode-se produzir moléculas antimicóticas
Databáze: Networked Digital Library of Theses & Dissertations
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