Apoptose na patogenia do do loxoscelismo cutâneo experimental em coelho: abordagens morfológica e imunoistoquímica
| Autor: | Núbia Braga Pereira |
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| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2010 |
| Zdroj: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFMGUniversidade Federal de Minas GeraisUFMG. |
| Druh dokumentu: | masterThesis |
| Popis: | Accidents with Loxosceles spiders represent a relevant medical problem in Brazil. The Loxosceles bite to a dermonecrotic and hemorrhagic injury that can be followed by systemic manifestations. The dermonecrotic injury is preceded by thrombus formation in dermal vessels near to the bite site. It was shown recently that apoptosis of endothelial cell surrounding atherosclerotic plaques predisposes to thrombosis. Apoptosis is a kind of cellular death that is carried out with e nergy expenditure, besides protein synthesis and degradation. Up to now, there are no studies in vivo showing whether the poison of L. similis induces apoptosis of endothelial cells. Additionally, there are no descriptions of the histological lesion induced by the L. similis bite. The aim of this study is: (1) to analyze histologically at first, the induced injury in the skin of rabbits inoculated with the poison and (2) to evaluate the importance of apoptosis in the mechanism of the loxoscelism. Forty male rabbits were divided in 2 groups: (1) control - inoculated intradermically with 50 µl of PBS and (2) treated- inoculated intradermically with 0,5 µg of the L. similis crude venom diluted in 50 µl of PBS. Animals were analyzed 2, 4, 6 and 8 hours after inoculation. Fragments of skin were collected, fixed in 10% buffered formalin, routinely processed and paraffin embedded. Sections of 5 µm were stained with HE. Some sections were submitted to the TUNEL reaction and other sections were submitted to immunohistochemical detection of Bax. Skin samples were also fixed in glutaraldehyde and embedded in methacrylate. Sections 3 µm thick were stained with HE adapted to methacrylate. The crude L. similis venom induces a lesion characterized by oedema, inflammatory infiltrate predominantly heterophilic, fibrinoid necrosis of the arterial and arteriolar walls, thrombosis in all dermal layers and necrosis of the cutaneous muscle whose intensity progressed with the time interval. The lesion intensity increased with the inoculation time becoming into severe heterophilic dermatitis 8 hours post inoculation. A similar lesion is observed in experiments using the crude venom of other Loxosceles species. Additionally, 2 hours post inoculation, shrunken endothelial cells were noted, losing adhesion one to another and to the extracellular matrix (anoykic cells), containing basophilic nuclei, and condensed chromatin, suggesting apoptosis. Some sections were subjected to TUNEL assay and immunohistochemistry for Bax. Present data suggest that the crude L. similis venom induces apoptosis of endothelial cells. On the basis of the present study it can be concluded that the poison of L. similis induces apoptosis of endothelial cells. Acidentes com aranhas do gênero Loxosceles são um problema de relevância médica no Brasil. A picada da Loxosceles induz lesão dermonecrótica e hemorrágica, acompanhada, em alguns casos, de manifestações sistêmicas. A lesão dermonecrótica é antecedida pela trombose nos plexos dérmicos pró ximos ao local da picada. Recentemente, tem-se mostrado que a descamação de células endoteliais na proximidade da placa ateromatosa via apoptose predispõe à trombose. Apoptose é um tipo de morte celular que se processa com gasto de energia, além de síntese e degradação proteicas. Ainda não há, na literatura, a descrição das lesões histológicas produzidas pelo veneno da L. similis e, tampouco, estudos in vivo que demonstrem se o mesmo induz apoptose de células endoteliais. Os objetivos deste estudo foram: (1) analisar histologicamente e relatar, pela primeira vez, a lesão induzida na pele de coelhos injetados com o veneno de L. similis e (2) avaliar a importância da apoptose no mecanismo do loxoscelismo. Foram utilizados 40 coelhos Nova Zelândia, machos que foram divididos em 2 grupos: (1) controle injetados intradermicamente com 50 µl de PBS e (2) tratado injetados intradermicamente com 0,5 µg de veneno bruto diluído em 50 µl de PBS. Os grupos foram analisados 2, 4, 6 e 8 horas após a injeção. Fragmentos de pele foram colhidos, fixados em formol tamponado a 10% e processados rotineiramente para a inclusão em parafina. Cortes de 5 µm foram corados em HE. Algumas secções foram submetidas à reação de TUNEL e a imunoistoquímica para Bax. Algumas amostras de pe le foram também fixadas em glutaraldeído para inclusão em metacrilato. Secções de 3 µm foram coradas em HE. A análise microscópica mostrou que o veneno bruto da L. similis induz a uma lesão caracterizada por: edema envolvendo toda a derme e se estendendo a té o músculo cutâneo, trombose em todas as camadas da derme, infiltrado inflamatório predominantemente heterofílico, necrose fibrinóide em paredesarteriolares, hemorragia dérmica e necrose do músculo cutâneo. A intensidade da lesão progrediu com o intervalo de tempo. Além destas alterações, a partir de 2 horas de injeção do veneno, observou-se, em alguns vasos, a presença de células endoteliais contraídas, apresentando perda de adesão entre si e com a matriz extracelular (anoiquia), contendo núcleo retraído, carioteca irregular e cromatina condensada, caracterizando apoptose. Algumas secções foram submetidas à reação de TUNEL e a imunoistoquímica para Bax. A consequente descamação do endotélio via apoptose parece ser o principal fator indutor de trombose nos plexos dérmicos que culmina com a dermonecrose característica do loxoscelismo cutâneo. Com base no presente estudo pode -se concluir que o veneno de L. similis induz apoptose de células endoteliais. |
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