Avaliação do potencial de amostras clínicas de coleta não invasiva para o diagnóstico molecular da leishmaniose visceral canina por PCR

Autor: Sidney de Almeida Ferreira
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2012
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFMGUniversidade Federal de Minas GeraisUFMG.
Druh dokumentu: Doctoral Thesis
Popis: An accurate diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL) based on simple procedures for sample collection is very important as an auxiliary measure control of this severe disease. In this work we used conventional PCR to evaluate the potential of clinical samples obtained noninvasively as follows: conjunctival, nasal, oral and ear swabs for the diagnosis of CVL. In addition, we analyzed the parasite loads obtained from these samples and the possible implications using the real time PCR (qPCR). Naturally infected dogs were collected in the Municipal Zoonotic Diseases Control Department of Belo Horizonte-MG. Ten healthy no infected dogs were adopted as control group. The animals were collected in three different moments. Firstly, 80 dogs were obtained and divided into two groups with 40 dogs: group 1 without clinical signs and group 2 with clinical signs. From all these animals, the conjunctival swab from each eye, bone marrow, skin biopsy and peripheral blood were collected and submitted to the PCR-hybridization and qPCR. The frequencies of positive results obtained by kDNA PCR/hybridization for asymptomatic and symptomatic dogs, respectively, were as follows: right conjunctiva, 77.5% and 95.0%; left conjunctiva, 75.0% and 87.5%; skin, 45.0% and 75.0%; bone marrow, 50.0% and 77.5%; and blood, 27.5% and 22.5%. The PCR-hibridization positivity for conjunctival swab was equivalent (p>0.05) or higher than those for other samples (p0.05). The antiLeishmania IgG titers from dogs with clinical manifestations were higher than those from dogs without clinical signs (p = 0.025). Positive and significant correlations were detected between parasitism and IgG titers only in the bone marrow and skin from dogs without clinical signs (p0.05). Its parasite load was statistically equivalent to the parasitism in the conjunctival swab (p>0.05) and lower than the parasite burden in the bone marrow and skin (p0.05). The parasite burden in the oral swab was equivalent to the parasitism in the conjunctival and nasal swabs (p>0.05) and lower than those estimated in the other samples (p
O uso de procedimentos simples para coleta de amostras e a realização de um diagnóstico eficiente da leishmaniose visceral canina (LVC) são de grande relevância para auxiliar o controle desta grave doença. Com base nisso, avaliou-se o potencial de amostras clínicas de coleta não invasiva como os swabs conjuntival, nasal, oral e swab de pele orelha para o diagnóstico molecular da LVC, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase convencional (PCR). Além disso, foram avaliadas as cargas parasitárias obtidas destas amostras e suas possíveis implicações, utilizando a PCR em tempo real (qPCR). Para isso, foram utilizados cães naturalmente infectados obtidos no Centro de Controle de Zoonoses de Belo Horizonte-MG. Dez cães saudáveis e livres de infecção foram adotados como grupo controle. As amostras destes animais foram coletadas em três momentos diferentes. Na primeira coleta, foram obtidos 80 cães que foram divididos em dois grupos de 40 indivíduos de acordo com a ausência (grupo 1) ou presença de sinais clínicos compatíveis com a LVC (grupo 2). Destes animais, foram coletados o swab conjuntival separadamente de cada ocular, aspirados de medula óssea, biópsia de pele de orelha e sangue periférico. Estas amostras foram submetidas à PCR-hibridização e à qPCR. Os resultados da PCR-hibridização para os grupos 1 e 2 foram respectivamente: conjuntiva direita, 77,5% e 95%; conjuntiva esquerda, 75% e 87,5%; pele de orelha, 45% e 75%; medula óssea, 50% e 77,5%; sangue periférico, 27,5% e 22,5%. As positividades da PCR-hibridização para o swab conjuntival foram equivalentes (p>0,05) ou superiores àquelas referentes às amostras de coleta invasiva (p0,05) e mais altas em relação às demais amostras dentro de cada grupo (p0,05). A carga parasitária estimada para o swab nasal foi equivalente àquela obtida com o swab conjuntival (p> 0,05) e inferior ao parasitismo na medula óssea e pele de orelha (p0,05) e superou apenas o dado referente ao swab de pele de orelha (p = 0,013). A carga parasitária no swab oral foi equivalente àquelas estimadas nos swabs conjuntival e nasal (p>0,05) e inferior em relação às outras amostras clínicas (p
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