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Introduction and objectives: Long non-coding RNAs (lncRNAs) have garnered interest because of their roles in cancer progression. We aimed to explore the role of the lncRNA embigin pseudogene 1 (EMBP1)-miR-9-5p axis in renal cell carcinoma (RCC). Materials and methods: Expression profiling of miR-9-5p and EMBP1 were performed in RCC cell lines and tumor samples. To evaluate miR-9-5p and EMBP1's role in proliferation, invasion, migration, and colony formation, we performed in vitro assays along with studies in a xenograft tumor model. In silico binding site analysis using the RNA22 algorithm, RNA-immunoprecipitation (RIP), and luciferase reporter assays were used to validate a direct interaction between EMBP1 and miR-9-5p. Changes in key proteins were also analyzed. Results: miR-9-5p was significantly down-regulated, and EMBP1 was significantly up-regulated, in RCC cell lines and tumor tissue. The clinicopathological characteristics of RCC patients significantly correlated with their expression. Overexpression of miR-9-5p or EMBP1 suppression in RCC cell lines significantly retarded their proliferative, migratory, and invasive behavior, in addition to promoting apoptosis and cell-cycle arrest. EMBP1 directly binds to and negatively regulates miR-9-5p. The EMBP1-miR-9-5p axis dysregulated the expression of the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) markers E-cadherin, claudin, and vimentin, the stemness markers KLF4 and Nanog, and the cell cycle checkpoint gene cyclin E2 (CCNE2) and its downstream mediator E2F1. miR-9-5p overexpression or EMBP1 suppression inhibited xenograft tumor growth in vivo, effects that were abrogated by CCNE2 overexpression. Conclusions: Our findings suggest an important role of the EMBP1/miR-9-5p axis dysregulation in RCC tumor progression. Resumen: Introducción y objetivos: Los ARN no codificantes largos (ARNncl) han recibido interés debido a sus diversos roles en la progresión del cáncer. Nuestro objetivo era explorar el rol del eje ARNncl pseudogén embigin 1 (EMBP1)-miR-9-5p en el carcinoma de células renales (CCR). Materiales y métodos: La descripción de la expresión de miR-9-5p y EMBP1 se realizó en líneas de células del CCR y muestras tumorales. Para evaluar el rol de miR-9-5p y EMBP1 en la proliferación, la invasión, la migración y la formación de colonias, realizamos ensayos in vitro junto con estudios en un modelo de tumor de xenotrasplante. Se utilizaron análisis del lugar de unión in silico mediante el algoritmo RNA22, inmunoprecipitación de ARN (RIP) y ensayos de luciferasa para validar una interacción directa entre EMBP1 y miR-9-5p. También se analizaron los cambios en las principales proteínas. Resultados: El compuesto miR-9-5p se reguló a la baja significativamente y EMBP1 se reguló al alza significativamente, en las líneas de células del CCR y en el tejido tumoral. Las características clinicopatológicas de los pacientes con CCR estaban significativamente relacionadas con su expresión. La sobreexpresión de miR-9-5p o la supresión de EMBP1 en las líneas de células del CCR retrasó significativamente su comportamiento proliferativo, migratorio e invasivo, además de favorecer la apoptosis y la detención del ciclo celular. EMBP1 se une directamente a miR-9-5p y lo regula negativamente. El eje EMBP1/miR-9-5p desreguló la expresión de los marcadores de la transición epitelio-mesénquima (TEM), E-cadherina, claudina y vimentina, los marcadores de troncalidad KLF4 y Nanog, y el gen de punto de control del ciclo celular ciclina E2 (CCNE2) y su mediador descendente E2F1. La sobreexpresión de miR-9-5p o la supresión de EMBP1 inhibió el crecimiento del tumor de xenotrasplante in vivo, efectos que fueron invalidados por la sobreexpresión de CCNE2. Conclusiones: Nuestros hallazgos sugieren un rol importante de la desregulación del eje EMBP1/miR-9-5p en la progresión tumoral del CCR. |
