Distribución espacial de fibroblastos endoneurales en cultivos tridimensionales en geles de colágeno Tipo I

Autor: Leslie Yaneth Leal Mejía
Jazyk: English<br />Spanish; Castilian
Rok vydání: 2002
Předmět:
Zdroj: Acta Biológica Colombiana, Vol 7, Iss 2, Pp 61-62 (2002)
Druh dokumentu: article
ISSN: 0120-548X
1900-1649
Popis: SaludRESUMENEn la actualidad los cultivos celulares tridimensionales son muy utilizados, ya que imitan lascondiciones in vivode las células. Uno de los cultivos más desarrollados es el de fibroblastosdérmicos dentro de geles de colágeno en forma de lenteja, los cuales se contraen de un 70%a un 80% durante las primeras 24 horas de cultivo. El objetivo inicial de este trabajo fue aislarfibroblastos endoneurales (FE) del nervio ciático de ratones ICR, mantenerlos en cultivo enmonocapa y luego en cultivo tridimensional en geles cilíndricos de colágeno tipo I de 1,6 mmde diámetro y 3 mm de largo, formados en las prótesis de silicona empleadas para regeneraciónde nervios periféricos; imitando las condiciones del nervio in vivopara que pueda ser emplea-dos en regeneración. Inicialmente se retira epineuro y perineuro del nervio, dejando sólo elendoneuro que se disocia con colagenasa (500U/ml) y luego se le hace una disociación me-cánica. Las células libres, se cultivan en monocapa con DMEM suplementado con 20% suerobovino fetal, logrando un 95% de pureza en cultivo primario; en los subcultivos se purifican yamplifican los FE. Estos se aislan y se mezclan con una solución de colágeno tipo I a 0,5mg/mlpara la formación de los geles, teniendo en cuenta que cada gel contenga 50.000 fibroblastos,se introduce la mezcla dentro de las prótesis de silicona y se dejan gelificar, siguiendo el mismoprocedimiento se formaron geles sin células; una vez formados los geles se liberan de las cáma-ras y se cultivan en suspensión 1, 3, 5, 7, 15 y 30 días. Al cumplirse cada uno de los tiemposde cultivo, se analizó la apariencia del colágeno y la distribución de los FE en microscopíaóptica y de fluorescencia. Los cultivos primarios de FE se obtuvieron a los 5 días, lograndoacortar el tiempo de confluencia entre 15 y 20 días con respecto a lo reportado en la literatura;un dato novedoso fue la purificación total de los FE en el primer subcultivo. En los geles sincélulas se observa una degradación progresiva del colágeno que se evidencia por primera vez alos 15 días de cultivo y es total a los 30 días. Durante los primeros 7 días de cultivo, los FEdentro de los geles tuvieron una viabilidad alta (superior al 80%) y se distribuyeron homo-géneamente; además la contracción de los geles es muy leve, del 60% a los 7 días. En el día 15 se observó una migración de las células hacia la periferia y los geles se contrajeron en un 63%y el colágeno se observa muy degradado. A los 30 días la contracción del gel es del 70%, laviabilidad de los fibroblastos es muy baja y el colágeno está casi totalmente degradado. Estetrabajo presenta por primera vez el aislamiento de fibroblastos endoneurales y su cultivo tri-dimensional, además de la utilización de geles en forma de cilindro; en donde los FE se distr-ibuyen homogéneamente y producen una contracción relativamente baja de los geles en losprimero 7 días de cultivo. Estos geles tridimensionales imitan la morfología del endoneuro.
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