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【目的】对成人视网膜前体细胞进行体外分离、培养和鉴定。【方法】成人眼球 12 只,“机械分离联合酶消化法”分离出睫状上皮层的色素性细胞, 10 ng/mL 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) +10 ng/mL 表皮生长因子(EGF) 的无血清 DMEM/F12 培养液中培养, 并从三方面鉴定其神经干细胞特性: A. 免疫荧光染色检测神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白 Nestin 的表达 ; B. 自我更新能力 : 原代神经球消化传代后 , 继续培养观察新神经球的形成; C. 多向分化潜能: 原代细胞培养 4～5 d, 改用含 10 mL/L 胎牛血清的 DMEM/F12 培养液 ,继续培养 7～10 d, 分别用抗神经丝蛋白 ( NF) 抗体、抗微管相关蛋白- 2 ( MAP2) 抗体、抗胶质纤维酸性蛋白( GFAP) 抗体、抗视紫质蛋白抗体、抗 β- 微管蛋白抗体以及抗无长突细胞特异性抗体作免疫荧光细胞染色。【结果】0.48%±0.08%( 1∶208) 原代细胞在含 bFGF+EGF 无血清培养条件下能保持增殖未分化状态 , 形成神经球样结构, 消化传代后 90.1%±8.3%的第二代细胞能重新形成新的神经球样结构, 具有自我更新能力 ; 原代及传代后的神经球均表达神经干细胞特异性抗原 nestin; 在含 10 mL/L 胎牛血清的促分化培养液中 , 细胞分别分化为可表达神经细胞、星形神经胶质细胞和感光细胞等特异性抗原的细胞, 表明具有多向分化潜能。【结论】在成人眼睫状体扁平部分离得到具有干细胞特性的视网膜前体细胞, 并在体外成功进行培养鉴定。 |
