Expression of human alcohol dehydrogenase ADH1B2 in Pichia pastoris and its activity analysis(人乙醇脱氢酶ADH1B2在毕赤酵母中的表达及活性分析)

Autor: TANGTian-tian(汤甜甜), ZHOULiang(周亮), JIPeng-fei(吉鹏飞), BAOWen-na(鲍文娜), GONGXing-guo(龚兴国)
Jazyk: čínština
Rok vydání: 2012
Předmět:
Zdroj: Zhejiang Daxue xuebao. Lixue ban, Vol 39, Iss 5, Pp 557-563 (2012)
Druh dokumentu: article
ISSN: 1008-9497
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9497.2012.05.013
Popis: 根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115;重组毕赤酵母工程菌经0.5%(v/v)甲醇诱导72 h后目的蛋白以可溶形式表达,经DEAE-Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8 000 U • mg-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADH1B2转染HepG2人肝癌细胞,发现细胞内ROS/GSH水平降低,Akt磷酸化水平降低,细胞活性下降.为临床酒精中毒预防和治疗药物的研发以及ADH在肝脏肿瘤方面的研究提供了理论基础.
Databáze: Directory of Open Access Journals