PCR FLUORESCENTE ASSOCIADA À ELETROFORESE CAPILAR COMO FERRAMENTA DE DIAGNÓSTICO DE BACTÉRIAS NO SEMEN
| Autor: | Francisca E. Ferreira Dias, Cáris Marone Nunes, Tânia Vasconcelos Cavalcante, Andréa A. Pires de Castro, Jorge Luis Ferreira, José Fernando Garcia |
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| Jazyk: | English<br />Portuguese |
| Rok vydání: | 2013 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Ciência Animal Brasileira, Vol 14, Iss 3 (2013) |
| Druh dokumentu: | article |
| ISSN: | 1518-2797 1809-6891 |
| Popis: | Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 100 a 107 bactérias/mL e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. A amplificação por PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores, previamente descritos na literatura, BF–5’gcgctcaggctgccgacgcaa3’ (cromóforo FAM) e BR–5’accagccattgcggtcggta3’ para B. abortus.) Os pares de oligonucleotídeos geraram fragmentos de 193 pb. Após PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em gel de acrilamida 8% corada pela prata e por eletroforese capilar fluorescente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. A detecção de DNA de B. abortus em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 103 bactérias/mL, enquanto que em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 105 bactérias/mL. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa rápida, eficaz e de alta sensibilidade na detecção de DNA de Brucella em sêmen bovino, podendo ser uma valiosa ferramenta para a avaliação da sanidade do rebanho e para o controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial. ALAVRAS-CHAVE: Brucella abortus; diagnóstico; eletroforese capilar; PCR fluorescente; sêmen bovino. |
| Databáze: | Directory of Open Access Journals |
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