Grb10 characterization in bovine cumulus oocyte complexes from different follicle sizes

Autor: Paulo Roberto Antunes da Rosa, Rodrigo Camponogara Bohrer, Charles Alencar Ludke, Matheus Pedroti De Cesaro, Gabriel Ribas Pereira, Rafael Gianela Mondadori, Alfredo Quites Antoniazzi, Paulo Bayard Dias Gonçalves
Jazyk: English<br />Portuguese
Rok vydání: 2015
Předmět:
O objetivo deste estudo foi investigar a expressão de RNAm e a localização da proteína Grb10 em complexos cumulus-oócito (CCO)
oriundos de folículos bovinos em diferentes fases de desenvolvimento. Primeiramente
foi investigada a expressão de RNAm e relacionada com as taxas de maturação. CCOs oriundos de folículos com diâmetro de 1-3
4-6
6-8 e >8mm foram utilizados para avaliar a expressão de RNAm por PCR em tempo real e para analisar os estádios de maturação nuclear. Foi observado que os oócitos mais competentes para a progressão meiótica (oriundos de folículos com diâmetro de 6-8 e >8mm
P>0.05) tiveram menor expressão de RNAm para Grb10
quando comparados aos CCOs oriundos de folículos com 1-3 e 4-6mm (P>0.05). Posteriormente
foi realizada a técnica de imunofluorescência em CCOs oriundos de folículos de diferentes tamanhos (1-3
4-6
6-8 e >8mm) para investigar a localização da proteína Grb10. As amostras foram incubadas com o anticorpo primário: anti-Grb10 policlonal
produzido em coelho (1:100). O anticorpo primário foi detectado utilizando um anticorpo secundário
IgG anti-coelho
produzido em cabra
conjugado com Alexa Fluor 488 (1:500). A fluorescência foi detectada em todas as amostras analisadas
porém
menos evidente nos CCOs oriundos dos folículos maiores. Os resultados apresentados neste estudo caracterizam o gene Grb10 em CCOs de bovinos e fornecem evidências do seu envolvimento na maturação molecular do oócito.
RNAm
proteína
maturação
oócito
Grb10.
Agriculture
Agriculture (General)
S1-972
Zdroj: Ciência Rural, Vol 45, Iss 5, Pp 898-904 (2015)
Druh dokumentu: article
ISSN: 1678-4596
0103-8478
DOI: 10.1590/0103-8478cr20140762
Popis: The objective of this study was to investigate the mRNA expression and protein localization of Grb10 gene in bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) from different follicle sizes. Firstly, it was investigated the mRNA expression to correlate with maturation rates. COCs from follicles at 1-3, 4-6, 6-8 and >8mm were used to evaluate Grb10 gene expression by qRT-PCR assay and nuclear maturation rates. It was observed that more competent oocytes (from follicles at 6-8 and >8mm; P>0.05), had lower Grb10 mRNA expression levels when compared to the oocytes from follicles at 1-3 and 4-6mm (P>0.05). After it was performed an immunofluorescence analysis in COCs from different follicle sizes (1-3, 4-6, 6-8 and >8mm) to investigate Grb10 protein localization. Samples were incubated with primary antibody: Polyclonal rabbit anti-Grb10 (1:100). Primary antibody was detected using goat anti-rabbit IgG antibody conjugated with Alexa Fluor 488 (1:500). Positive fluorescence signal was detected in all analyzed samples but less evident in COCs from largest follicles. These results characterized Grb10 gene in bovine COC and provide evidences for its involvement during oocyte molecular maturation.
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