Exploring the Potential of β-Catenin O-GlcNAcylation by Using Fluorescence-Based Engineering and Imaging

Autor: Kasprowicz, Angelina, Spriet, Corentin, Terryn, Christine, Rigolot, Vincent, Hardivillé, Stephan, Alteen, Matthew G., Lefebvre, Tony, Biot, Christophe
Přispěvatelé: Université de Lille, LillOA, ULNE - - ULNE2016 - ANR-16-IDEX-0004 - IDEX - VALID, Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle - UMR 8576 (UGSF), Université de Lille-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Plateformes Lilloises en Biologie et Santé - UAR 2014 - US 41 (PLBS), Institut Pasteur de Lille, Réseau International des Instituts Pasteur (RIIP)-Réseau International des Instituts Pasteur (RIIP)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Université de Lille-Centre Hospitalier Régional Universitaire [Lille] (CHRU Lille)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Plateforme en Imagerie Cellulaire et Tissulaire (PICT), Université de Reims Champagne-Ardenne (URCA)-SFR CAP Santé (Champagne-Ardenne Picardie Santé), Université de Reims Champagne-Ardenne (URCA)-Université de Picardie Jules Verne (UPJV)-Université de Reims Champagne-Ardenne (URCA)-Université de Picardie Jules Verne (UPJV), Simon Fraser University (SFU.ca), This study was supported by the French government through the Programme Investissement d’Avenir (I-SITE ULNE/ANR-16-IDEX-0004 ULNE) managed by the Agence Nationale de la Recherche, I-SITE CLICKNFRET, ANR-16-IDEX-0004,ULNE,ULNE(2016), Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle (UGSF), Université de Lille-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)-Institut National de Recherche pour l’Agriculture, l’Alimentation et l’Environnement (INRAE), Plateformes Lilloises en Biologie et Santé - UMS 2014 - US 41 (PLBS), Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle UMR 8576 (UGSF), Institut National de la Recherche Agronomique (INRA)-Université de Lille-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Université de Lille, CNRS, Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle - UMR 8576 [UGSF], Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle UMR 8576 [UGSF], Plateformes Lilloises en Biologie et Santé - UAR 2014 - US 41 [PLBS], Plateforme en Imagerie Cellulaire et Tissulaire [PICT], Simon Fraser University [SFU.ca], Université de Reims Champagne-Ardenne (URCA)-Université de Reims Champagne-Ardenne (URCA)
Jazyk: angličtina
Rok vydání: 2020
Předmět:
Zdroj: Molecules
Molecules, 2020, 25 (19), pp.4501. ⟨10.3390/molecules25194501⟩
Volume 25
Issue 19
Molecules, MDPI, 2020, 25 (19), pp.4501. ⟨10.3390/molecules25194501⟩
Molecules, MDPI, 2020, Molecules, 25 (19), pp.4501. ⟨10.3390/molecules25194501⟩
Molecules, Vol 25, Iss 4501, p 4501 (2020)
ISSN: 1420-3049
DOI: 10.3390/molecules25194501⟩
Popis: Monitoring glycosylation changes within cells upon response to stimuli remains challenging because of the complexity of this large family of post-translational modifications (PTMs). We developed an original tool, enabling labeling and visualization of the cell cycle key-regulator &beta
catenin in its O-GlcNAcylated form, based on intramolecular Fö
rster resonance energy transfer (FRET) technology in cells. We opted for a bioorthogonal chemical reporter strategy based on the dual-labeling of &beta
catenin with a green fluorescent protein (GFP) for protein sequence combined with a chemically-clicked imaging probe for PTM, resulting in a fast and easy to monitor qualitative FRET assay. We validated this technology by imaging the O-GlcNAcylation status of &beta
catenin in HeLa cells. The changes in O-GlcNAcylation of &beta
catenin were varied by perturbing global cellular O-GlcNAc levels with the inhibitors of O-GlcNAc transferase (OGT) and O-GlcNAcase (OGA). Finally, we provided a flowchart demonstrating how this technology is transposable to any kind of glycosylation.
Databáze: OpenAIRE
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