| Autor: |
Hua, Dai, Zheng-Zhong, Xu, Meiling, Wang, Jun-Hua, Chen, Xiang, Chen, Zhi-Ming, Pan, Xin-An, Jiao |
| Rok vydání: |
2016 |
| Předmět: |
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| Zdroj: |
Canadian journal of veterinary research = Revue canadienne de recherche veterinaire. 80(2) |
| ISSN: |
1928-9022 |
| Popis: |
The aim of the present work was to develop reagents to set up a chicken interferon-γ (ChIFN-γ) assay. Four monoclonal antibodies (mAbs) specific for ChIFN-γ were generated to establish sandwich ELISA based on 2 different mAbs. To improve the detection sensitivity of ChIFN-γ, a double-monoclonal antibody sandwich ELISA was developed using mAb 3E5 as capture antibody and biotinylated mAb 3E3 as a detection reagent. The results revealed that this ELISA has high sensitivity, allowing for the detection of 125 to 500 pg/mL of recombinant ChIFN-γ, and also has an excellent capacity for detecting native ChIFN-γ. This ELISA was then used to detect ChIFN-γ level in chickens immunized with a Newcastle disease virus (NDV) vaccine, the immunized chicken splenocytes were stimulated by NDV F protein as recall antigen. From our results, it appears that the sensitivity range of this sandwich ELISA test is adequate to measure the ex vivo release of ChIFN-γ.L’objectif de la présente étude était de développer des réactifs afin de mettre au point une épreuve de détection de l’interféron-γ de poulet (ChIFN-γ). Quatre anticorps monoclonaux (AcMo) spécifiques pour ChIFN-γ ont été produits afin d’avoir un ELISA sandwich reposant sur deux AcMo différents. Afin d’améliorer la sensibilité de détection de ChIFN-γ, un test ELISA sandwich a deux anticorps monoclonaux a été développé utilisant l’AcMo 3E5 comme anticorps de capture et l’AcMo 3E3 biotinylé comme réactif de détection. Les résultats ont démontré que ce test ELISA possède une sensibilité élevée, permettant la détection de 125 à 500 pg/mL de ChIFN-γ recombinant, et ayant également une excellente capacité à détecter le ChIFN-γ original. Ce test ELISA a par la suite été utilisé pour détecter les quantités de ChIFN-γ chez des poulets immunisés avec un vaccin contre la maladie de Newcastle (NDV), les cellules de la rate des poulets immunisés ont été stimulées par la protéine F du NDV comme antigène de rappel. À partir de nos résultats, il semble que la plage de sensibilité de ce test ELISA sandwich est adéquate pour mesurer la libération |
| Databáze: |
OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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