一种新的CD123嵌合抗原受体T细胞的构建及其抗白血病作用探究
| Jazyk: | angličtina |
|---|---|
| Rok vydání: | 2020 |
| Předmět: | |
| Zdroj: | Chinese Journal of Hematology |
| ISSN: | 2707-9740 0253-2727 |
| Popis: | 目的 构建一种新的靶向CD123的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)，为CD123阳性白血病的免疫治疗提供实验参考。 方法 通过单克隆筛选技术获得能稳定分泌CD123抗体的杂交瘤细胞株6E11，将杂交瘤细胞扩增后腹腔注射至Balb/c小鼠腹腔内，收集腹水并处理、纯化得到单克隆抗体，测定抗体效价并对其特异性进行验证；RT-PCR法获得轻链和重链可变区序列，并以此为基础利用分子克隆技术构建一种新的靶向CD123嵌合抗原受体，包装病毒后感染T细胞制备CD123CAR-T细胞，通过功能实验初步探讨6E11CAR-T细胞体外抗白血病的能力。 结果 ①获得1株稳定分泌抗人CD123抗体的杂交瘤细胞株6E11并获得其可变区序列。②6E11单克隆抗体对CD123蛋白亲和性高，解离常数(Kd值)为2.10nmol/L，特异性识别CD123阳性细胞且与CD123阴性细胞无交叉反应。 ③成功构建了CD123CAR慢病毒载体，感染T细胞后获得了靶向CD123的CAR-T细胞(6E11CAR-T)，感染效率大于60％。 ④6E11CAR-T能明显杀伤CD123阳性靶细胞MV4-11，效靶比1∶1时6E11CAR-T细胞对MV4-11细胞的杀伤比例明显高于 Vecor-T细胞[(98.60±1.20)％对(20.28±6.74)％，P |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|