| Popis: |
Diese Arbeit befasst sich mit der Auswirkung der Ligandenbindung auf die Allergenität von Alt a 1. Hintergrund: Alternaria alternata ist ein weit verbreiteter Pilz, welcher in engem Zusammenhang mit schwerem allergischem Asthma steht, wobei 80% der Betroffenen gegen sein Hauptallergen Alt a 1 sensibilisiert sind. In dieser Arbeit wurde die Bindung von potenziellen Liganden zu Alt a 1, sowie die Auswirkung der Ligandenbindung auf seine Allergenität untersucht. Methoden: Um die Bindung von Alt a 1 zu Eisenkomplexen zu beurteilen wurden die Liganden allein oder in Kombination mit verschiedenen Konzentrationen von rekombinantem Alt a 1 mittels UV-VIS Spektroskopie gemessen. Die IgE-Bindung von Alt a 1 ohne Bindungspartner (apoAlt a 1) und mit Bindungspartner (holoAlt a 1) wurde mittels ELISA analysiert. Die Wirkung von apo- und holoAlt a 1 auf die spezifische Mastzelldegranulation wurde anhand der basophilen Rattenzelllinie RBLsx38 sowie der humanen mastzellähnlichen Zelllinie LAD2 untersucht. Ergebnisse: Die Bindung von Eisen-Komplexen an Alt a 1 wurde durch Spektroskopie bestätigt. Die IgE-Bindung durch sensibilisierte Personen (n=10) war mit Bindungspartnern im Vergleich zu apoAlt a 1 ohne Bindungspartner signifikant reduziert. Zusätzlich war die spezifische Mastzelldegranulation durch holoAlt a 1 vermindert. Schlussfolgerung: Die herausragende Affinität von Alt a 1 zu Eisenkomplexen deutet auf eine Rolle als Mikronährstoffbinder hin. Die Ligandenbindung wirkte sich stark auf die Allergenität von Alt a 1 aus und führte zu einer verringerten IgE-Bindung und einer reduzierten Mastzelldegranulation. This thesis deals with the impact of ligand-loading on the allergenicity of Alt a 1. Background: Alternaria alternata is a common fungus strongly related with severe allergic asthma with 80% of affected individuals being sensitized to its major allergen Alt a 1. Here, we assessed the binding of Alt a 1 to potential micronutritional ligands as well as the impact of ligand-binding on its allergenicity. Methods: To assess binding of Alt a 1 to iron complexes, ligands alone or in combination with different concentrations of recombinant Alt a 1 were measured by UV-VIS spectral analysis. IgE-binding to ligand-free (apo-) and ligand-filled (holo-) Alt a 1 was analyzed via ELISA. Impact of apo- and holoAlt a 1 on specific mast cell degranulation was assessed using the rat basophilic RBLsx38 cells as well as the human mast cell like cell line LAD2. Results: Binding of iron complexes to Alt a 1 was confirmed via spectral analysis. IgE recognition by sensitized individuals (n=10) was significantly reduced upon ligand-binding compared to apoAlt a 1. In addition, specific mast cell degranulation was reduced for holoAlt a 1. Conclusion: Alt a 1’s outstanding affinity to iron complexes suggests a role as micronutrient scavenger. Ligand-binding strongly affected the allergenicity of Alt a 1, leading to reduced IgE-binding and inhibited mast cell degranulation. |
