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In der onkologischen Forschung ist die Untersuchung von Proteinkomplexen zur Entwicklung neuer Wirkstoffe von besonderer Bedeutung. Für die Expression der einzelnen Proteine und Ausbildung eines solchen Komplexes in der Zelle, ist allerdings ein entsprechender Expressionsvektor mit spezifischen Eigenschaften nötig. Die Herstellung solcher Expressionskonstrukte war oft nicht nur ein komplexer, sondern auch zeitaufwändiger Arbeitsprozess. Durch die Anwendung einiger, neuer DNA-Assemblierungsmethoden, konnte die Herstellung der notwendigen Expressionsvektoren etwas schneller und unkomplizierter erfolgen. Leider war bei der Anwendung einiger Methoden ein flexibler Zusammenbau mehrerer DNA-Fragmente oft nicht möglich. Für die Erstellung eines solchen Multigen-Vektors mussten Kloniertechniken angewandt werden, die ein flexibles Zusammenfügen von Genfragmenten erlauben. Der Nachteil dieser Techniken besteht vor allem in der sehr zeit- und kostenintensiven Anwendung. Aus diesen Gründen wurde eine Kloniermethode entwickelt, welche die Vorteile Flexibilität, Einfachheit, Kosten- und Zeitersparnis bietet. Basierend auf der Golden-Gate-Klonierung wurde ein System etabliert, das die Zusammensetzung von mehreren Fragmenten, den sogenannten Bausteinen, zu einem Multigen-Konstrukt erlaubt. Zwecks einer sehr breiten Anwendungsmöglichkeit des Systems wurde eine Bausteinbibliothek angelegt. Diese enthält eine große Anzahl an verschiedenen DNA-Fragmenten, welche nun nahezu beliebig zur Erstellung eines Multigen-Vektors herangezogen werden können. Die Durchführung einer solchen Klonierung erfordert nur wenig Erfahrung, sodass diese auch von noch ungeübten Anwendern ausgeführt werden kann. In oncological research, the investigation of protein complexes for the development of new active substances is of particular importance. However, for the expression of the individual proteins and the formation of such a complex in the cell, a corresponding expression vector with specific properties is required. The production of such expression constructs was often not only a complex but also a time-consuming work process. By using some new DNA assembly methods, the production of the necessary expression vectors could be done a little faster and less complicated. Unfortunately, when using some methods, flexible assembly of multiple DNA fragments was often not possible. To create such a multigene vector, cloning techniques had to be used that allow gene fragments to be flexibly assembled. The main disadvantage of these techniques is that they are very time-consuming and expensive to use. For these reasons, a cloning method was developed that offers the advantages of flexibility, simplicity, cost and time savings. Based on Golden Gate cloning, a system was established that allows the assembly of several fragments, the so-called building blocks, into a multigene construct. A block library was created to allow the system to be used in a very wide range of applications. This contains a large number of different DNA fragments, which can now be used in almost any way to create a multigene vector. Carrying out such a cloning requires little experience, so that it can also be carried out by inexperienced users. Abweichender Titel laut Übersetzung der Verfasserin/des Verfassers Masterarbeit Wien, FH Campus Wien 2022 |
