| Popis: |
Bu çalışmanın amacı, in vitro koşullarında yüksek kriyotoleransa sahip embriyoları üreterek dondurulmuş embriyo üretmektir. Çalışmada mezbahada kesilen sığırların ovaryumları kullanılmıştır. Aspirasyon yöntemi ile elde edilen oositler (1632 adet) TCM-199'da 24 saat süreyle %5 CO2, %5 O2, %90 N2 gaz atmosferinde 38,5 °C de in vitro olarak olgunlaştırılmışlardır. Bu amaçla sırasıyla 4 grup oluşturulmuştur. Her bir IVM ortamında maturasyonu yapılan KOK'ler rastgele bir biçimde 4 farklı IVF ortamının içine konularak rastgele blok tasarımı oluşturulmuştur. Olgun oositler 24 saat süreyle fertilize edilmişlerdir. Fertilizasyon sonrası 48. saatte cleavage %67,05 (865/1290) saptanmıştır. Embriyolar 7 gün süreyle %5 CO2, %5 O2, %90 N2 gaz karışımında blastosist (%34,91; 302/865) aşamasına kadar inkübe edilmişlerdir. Zigot ve embriyolar taşıma ortamından (TCM199) 500 µL vitrifikasyon solüsyon 1'in (VS1) (5 M etilen glikol içeren taşıma ortamı) içine aktarılıp 3 dk sonra VS2'nin (7 M etilen glikol, %18 fikol 70 ve 0.5 M galaktoz içeren taşıma ortamı) içine aktarılarak payete doldurma zamanı dahil 45 sn'lik süre boyunca bu ortamda tutulmuştur. Erken blastosist-blastosist aşamasına ulaşan 302 adet embriyodan 254 tanesi vitrifikasyon solüsyonunda maruz bırakılarak dondurulmuşlardır. Zigot ve embriyolar open pulled payete yüklendikten sonra sıvı nitrojen içine daldırılıp dondurulmuştur. Verilerin değerlendirilmesinde Z testi kullanılmıştır. Çözdürme sonrası, genişlemiş blastosist-zona pellucida duvarından çıkma safhasında en iyi gelişim %52,2 (35/67) ile Grup 1 de saptanırken, bunu %45,3 (29/64) ile Grup 2, %22,2 (14/63) ile Grup 3 ve %5 (3/60) ile Grup 4 takip etmiştir. Grup 1 ve 2 arasında önemli bir fark bulunmamıştır. Grup 1 ile Grup 3 arasındaki fark P |
