| Popis: |
29 5. ÖZET ENDOTHELIAL CELL PROTEIN C/APC RESEPTÖR (EPCR) GENİ 7116, 23bp İNSERSİYON VE 7322 C-T POLİMORFİZMLERİNİN PEDİATRİK TROMBOZLAR ÜZERİNE ETKİSİ Protein C antikoagülant yolu kan koagülasyonunda major kontrol mekanizması olarak bilinir. Protein C, Protein S ve trombomodulin'deki kusur, hali hazırdaki diğer faktörleri de olaya dahil ederek venöz trombosisi geliştirir ve bazı şartlar altında arteriel trombozise de yardımcı olur. Protein C antikoagülant yolu trombin trombomodulin'e bağlandığı zaman başlar. Trombin-thorombomodulin kompleksi Protein C'yi hızla aktive eder. Protein C ve APC'nin bağlandığı, hücrenin dış yüzeyine bağlı, spesifik endothelial hücre transmembran proteini yakın zamanda tanımlanmıştır. Bu yeni protein Endothelial Cell Protein C / APC Reseptör (EPCR) olarak adlandırılmış ve Protein C'nin EPCR'ye direkt bağlandığı gösterilmiştir. İnsan EPCR geni 20qll.2'de lokalizedir. Üç intron ve dört eksondan oluşur. Ekson I; 5' okunmayan bölümü ve sinyal peptidi kodlar. Ekson IV; transmembranik bölgeyi, sitoplazmik kuyruğu ve 3* okunmayan bölgeyi kodlar. Ekson II ve HI EPCR'nin ekstraselüler bölgesinin uç kısmını kodlar. Bu çalışmada Endothelial Cell Protein C/APC Reseptör (EPCR) geni IH. ekson pozisyon 7116'da 23bp'lik insersyion ve pozisyon 7322'de C-T polimorfizmi sıklığı pediatrik trombozlu olgularda araştırıldı. EP3A ve EP3B primer çiftleri kullanılarak PCR ile EPCR geninin III. eksonu çoğaltıldı. PCR ürünü 407bp içerir. 7116'daki 23bp'lik insersiyonla bu uzunluk 430bp'a ulaşır. Bu 23bp'lik fark % 10'luk PAGE ile ayrılabilir. 73 22' deki C-T polimorfizmi EcoRI restriksiyon endonükleaz enziminin kesim noktasında bulunur. PCR ürünü EcoRI enzimi ile kesilerek bu polimorfizm ortaya konuldu. Bu çalışmada; ailevi tromboz öyküsü olmayan 121 birey kontrol grubu olarak ve tromboz tanısı almış, 18 yaş altı olan 148 olgu araştırıldı. EPCR geni III. Ekson pozisyon 7116'daki 23bp'lik insersiyonun bireylere göre dağılımına bakıldığında 121 bireylik kontrol grubunda bu insersiyonu heterozigot olarak bulunduran 2 kişi (% 1,65) ; 148 bireylik hasta grubunda ise heterozigot olarak bulunduran 2 kişi (%30 1,35) belirlenmiştir. Odds ratio'su 0,82 olarak hesaplanmıştır. Bu iki birey Retinal Ven Trombozu ve Serebral İnfarkt tanısı almışlardır. Bu iki bireyden birinde aynı zamanda Protrombin 20210 G/A mutasyonu bulunmuştur. EPCR geni HI. Ekson pozisyon 7322'deki C/T polimorfizmi ise 121 bireylik kontrol gurubunda C-C genotipine sahip 118 birey (% 97,52), C-T genotipine sahip 3 birey (% 2,48) bulunmuştur. 148 bireylik hasta gurubunda ise C-C genotipine sahip 147 birey (% 99,32), T-T genotipine sahip 1 birey (% 0,68) bulunmuştur. Odds ratio'su 2,41 olarak hesaplanmıştır. Sonuç: EPCR geni ekson III 7322 C/T polimorfizmi ve ekson m 7116, 23bp insersiyon gen değişimlerinin düşük frekans göstermektedir. Bu gen değişimlerinin düşük frekans göstermesi nedeniyle ve tromboz oluşumunda rolü olabileceği de dikkate alınarak, seçilmiş pediatrik trombozlu olgularda çalışılması uygun görülmektedir. Anahtar Sözcükler: EPCR, Protein C, Pediatrik Tromboz 31 6. SUMMARY ENDOTHELIAL CELL PROTEIN C / ACTIVATED PROTEIN C RECEPTOR (EPCR) GENE EXON HI, 23BP INSERTION MUTATIONIN TURKISH PEDIATRIC THROMBOTIC PATIENTS Endothelial cell-specific transmembrane protein that binds protein C and activated protein C (APC) on the cell surface, was named as endothelial cell protein C/APC receptor (EPCR). The human EPCR gene was cloned consisting of four exons. In a recent report of 23bp insertion of exon HI of the EPCR gene suggested that this may contribute to thrombosis in myocardial infarction and deep vein thrombosis. We aimed to determine the frequency of this mutation in healthy Turkish population and pediatric thrombotic cases. 121 healthy unrelated individuals without any familial history of thrombosis and stroke were included in the study.DNA was extracted by conventional methods and polymerase chain reaction of exon HI of the EPCR gene was performed according to previously described method using primers 5'-ACACCTGGCACCCTCTCT- 3' and 5' -CATCCTTCAGGTCCATCC- 3'. The distribution of 23bp ins of ex in of EPCR gene in healthy individuals are shown in data. The data when individuals with Protein C deficient (n:2) and FV 1691 A (n:26) were excluded. 2 of the 137 pediatric thrombotic cases carried 23bp ins mutation. The diagnosis of these two patients were retinal vein thrombosis and cerebral infarct respectively. In this study 121 indivuals were selected as a control group and 148 pediatric thrombosis patients were studied with an age range of 10 months to 18 years. Two the indivuals from control goup were found to carry of 23bp insertion on EPCR gene HI. exon pozition 7116 and the two patients were found to carry the same insertion. There was no difference between the pediatric stroke and controls. The two patients carried prothrombin 20210 A mutation at the same time. The C/T polymorphism on EPCR gene exon III pozition 7322 studied on the same control group and 118 of this 121 control were found cary C/C genotip. There of them were found carry C/T and32 147 of the patient groups were found to carry C/C genotip. One of them was found to carry T/T genotip. EPCR, Ex III 7116, 23bp insertion may have effect on the pathogenesis of pediatric thrombosis which needs further investigation. Key Words: EPCR, Protein C, Pediatric Thrombozis 537 |
