| Popis: |
Amaç: Miyeloproliferatif Neoplazi (MPN), miyeloid seri hücrelerinde somatik mutasyonlar nedenli artmış proliferasyon ile karakterize bir kök hücre hastalığıdır. Polisitemia vera, Esansiyel trombositemi ve Primer Miyelofibroz klasik MPN alt tipleridir. Bu araştırma ile MPN'deki miyeloproliferatif bozukluğa kemik iliği mikro çevresinin hipoksik koşulları (~%1 pO2) kaynaklı HIF1α ve NOS3 gen anlatımındaki bir değişimin yol açıp açmadığının gösterilmesi amaçlanmaktadır.Yöntem: Kemik iliği mikroçevre koşulları oksijen basıncına sahip hücre kültürü ortamında CellASIC ONIX cihazı kullanılarak farklı oksijen basıncı değerleri (%0, %1, %20) 16 MPN tanılı hastaya ve kontrol olarak 2 kordon kanına (KK) ait Hematopoetik ve Kanser Kök Hücrelerin (HKH-KaKH) CD34+ ve CD34- alt gruplarına uygulanmıştır. 24 saatlik hücre kültürü sonrası RNA izolasyonu ve cDNA sentezi gerçekleştirilmiştir. Kantitatif Gerçek Zamanlı PZR tekniği ile gen ifadelerindeki değişimler ve fonksiyonel test olarak da hipoksik koşullara KaKH ve KK'nın apoptoza yanıtı incelenmiştir.Bulgular: MPN hastalarına ait KH'lerin CD34+ alt grubundan CD34- gruplarına kıyasla daha yüksek konsantrasyonlu RNA örnekleri izole edildi. HIF1α ve NOS3 gen anlatımları MPN alt grupları arasında farklılık göstermekte olup kontrol grubu hücrelerine göre artış göstermiştir. JAK2V617F heterozigot (monoalelik) ve yabanıl tip alel taşıyan hücreler arasındaki farklılıklar anlamlı değildir. MPN türü tespit edilememiş grupta hipoksik koşullarda JAK2V617F heterozigot (monoalelik) olguda NOS3 anlatımı kontrole göre azalmış olarak bulunmuştur. Sonuç: Kemik iliği mikro çevresi veya kök hücre nişi, hematopoietik kök ve progenitör hücrelerin fonksiyonunu destekleyen kompleks bir sistemdir. Yapılan çalışma ile kanser tipine göre KaKH'nın hipoksi ve anoksiye yanıtlarının değerlendirilmesi gerektiği görülmüştür. MPN genotipi ve hipoksiye yanıtı hastalık tipine göre değerlendirilmelidir. Bu konuda daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç olduğu açıktır. Purpose: Myeloproliferative neoplasia is a disease with increased proliferation of myeloid blood cells, caused by somatic mutations. In this study, it is aimed to show whether myeloproliferative disorders leads to a change in HIF1α and NOS3 gene expression caused by hypoxic conditions of bone marrow microenvironment.Materials-Methods: Bone marrow microenvironment was applied to healthy controls and healthy patients' the subgroups of Hematopoietic Stem Cells (HSC), CD34+ and CD34- with different oxygen pressure values (0%, 1%, 5%) using the CellAsic ONIX device. cDNA synthesis and RNA isolation were performed after 24 hours of cell culture. Quantitative Real-Time PCR techniques were used to investigate the changes in gene expression.Findings: Higher concentration of RNA samples were isolated from CD34+ subgroups from MPN patients compared to CD34- groups. HIF1α and NOS3 gene expressions increased in pateints' stem cells than controls'. The differences between the heterozygous and wild-type allele for JAK2V617F exchange were not significant. In not classified MPN patients with JAK2V617F heterozygous allele, expression of NOS3 under hypoxic conditions was found to be decreased compared to control.Results: The bone marrow microenvironment or stem cell niche is a complex system that supports the function of hematopoietic stem and progenitor cells. According to the study, it was seen that the response to hypoxia and anoxia of CaSC should be evaluated according to the type of cancer. The MPN genotype and response to hypoxia should be evaluated according to the disease. It is clear that more comprehensive studies in this subject are needed. 72 |
