| Popis: |
Patojen ile ilişkili moleküler yapılar (PAMP'ler) ve tehlike ile ilişkili moleküler yapılar (DAMP'ler), doğuştan gelen immün yanıtların düzenlenmesi için sitozol içindeki NLR reseptör ailesi tarafından algılanır. NLRP3 gibi bazı NLR'ler, enflamasyon komplekslerin oluşumunu indükler. Kaspaz-1, apoptozla ilişkili zerrecik benzeri bir protein (ASC) ile etkileşime girerek inflamasom multiprotein kompleksi içinde aktive edilir. Apoptoz ile ilişkili zerrecik benzeri CARD içeren protein (ASC) 22 kDa büyüklüğünde, bir C-terminali kaspaz alım alanı (CARD) ve bir N-terminal pirin (PYD) alanı içeren sitozolik proteindir. Uyarıldıktan sonra, ASC filamentleri, birçok ASC molekülü ile birleşerek ASC zerreciği adı verilen küresel bir yapı oluşturur. Bu zerreler hücrenin içinde bulunabilir ve ya birçok sitokin gibi sinyalleri yükseltmek için hücre dışı boşluğa salınabilir. Grubumuzun önceki verilerinde ASC zerrelerine yapay yükleme yapıldığı gösterildi. PBS içerisindeki ASC zerrelerinin 37 C'de 30 gün boyunca stabil kaldığını gösterdik. Ayrıca ASC zerrelerinin farelerin dalağında uzun süre kalıcı olarak kaldığını gösterdik. Tezin amacı, antijen yüklü ASC zerrelerinin saflaştırılması ve ASC zerrelerinin kullanılması ile aşılama yapılmasıdır. ASC zerrelerinin adjuvan özelliklerini ortaya koymaya yönelik, THP-1 makrofajlarının, saflaştırılmış ASC zerreleri ile uyarılmasından sonra, IL-1beta ve TNF-alpha gibi bazı enflamatuar sitokinlerin salgılanmasında artış olduğunu gösterdik. Ayrıca, kH5-ASC ile immunize edilmiş C57BL/6 fareleri, diğer immunize edilmiş fare gruplarına kıyasla daha yüksek anti-H5 IgG seviyelerine sahipti. Son olarak, i.p. enjekte edilen kOVA-ASC zerreleri, C57BL/6 farelerinde EG7-OVA timoma tümörüne gittiğini ve tümörde tam eradikasyon ve ya küçülmeye neden olduğunu gösterdik. Pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and danger-associated molecular patterns (DAMPs) are sensed by the nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor (NLR) family of proteins in the cytosol for the regulation of innate immunity responses. Certain NLRs such as NLRP3 induce the formation of inflammasome complexes. Caspase-1 is activated within the inflammasome multiprotein complex via interaction with apoptosis-associated speck-like protein (ASC). The adaptor molecule apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD (ASC) is 22 kDa cytosolic protein that contains a C-terminal caspase recruitment domain (CARD) and an N-terminal pyrin (PYD) domain. Upon stimulation, ASC combines into filaments and with many ASC molecules to form a globular structure called ASC speck. These specks can exist inside the cell or can be released to the extracellular space in order to amplify the signals such as many cytokines. In previous data of our group, artificial loading of ASC specks was shown. We showed that ASC specks in PBS remained stable at 37 Cfor 30 days. We have also shown the long-lasting stability of ASC specks inside the spleen of mice. The aim of the thesis is to purify ASC specks with antigen epitopes and achieve vaccination using ASC specks. After stimulation of THP-1 macrophages with puried ASC specks, we showed an increase in the secretion of certain inflammatory cytokines such as IL-1beta and TNF-alpha. Besides, tH5-ASC immunized C57BL/6 mice had higher anti-H5 IgG levels compared to other groups of immunized mice. Lastly, we showed that i.p. injected tOVA-ASC specks may go to the EG7-OVA thymoma tumor in C57BL/6 mice and cause complete eradication or reduction in tumor size. 77 |
