| Popis: |
Bu çalışmada, bazı çevre kirleticileri ve kafeinin sığır ve insan eritrosit karbonik anhidraz enzimleri (CA) üzerine inhibisyon etkileri araştırılarak, inhibisyon kinetikleri incelenmiştir.Önce, sığır ve insan eritrositlerinden karbonik anhidraz enzimleri afinite kromatografisiyle saflaştırılmış, kinetik çalışmalar bunlarla yapılmıştır. İnsan eritrositlerinden elde edilen CA-I ve CA-II izoenzimlerinin aktiviteleri brompirüvat seçimli inaktivasyonu ile bulunmuştur. CA aktivite ölçümlerinde esteraz metodu kullanılmıştır.Kafeinin yanısıra, NaClÛ3, Na2Cr20y, triklorasetik asit, alachlor, carboxin, chloridazon, dalapon, dichlorvos, dnoc, metalaxyl, propoxur kirleticilerinden inhibisyon etkisi gösterenler için Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla Kj sabitleri, % aktivite - [I] grafikleri yoluyla da I50 değerleri hesaplanmıştır. İnhibisyona sebep olan tüm bileşikler nonkompetitiv (yanşmasız) tarzda etkili olmuşlardır.Sığır eritrosit CA enzimi üzerine kafein, NaC103, Na2 O2O7, TC A, dichlorvos ve dalapon inhibisyon etkisi göstermiştir. Bunlar için bulunan ortalama Kj sabitleri sırayla; 1,69 x İÜ'3 M, 5,07 x 10'3 M, 3,35 x 10'4 M, 4,78 x 10'3 M, 5,28 x 10'3 M, 1,22 x 10-5 m, I50 değerleri ise, 2,15 x 10'3 M, 4,70 x 10`3 M, 3,01 x 10`4 M, 3,62 x 10-3 M, 3,81 x 10-3 M, 1,62 x 10'5 M'dır.İnsan eritrosit CA-Î ve CA-H izoenzimleri üzerine ise kafein, NaC103, TCA, dalapon ve dichlorvos etkili olmuşlardır. CA-I izoenzimi için bu bileşiklerin ortalama Kj sabitleri sırasıyla; 1,58 x 10`3 M, 1,73 x 10`3 M, 1,69 x 10'3 M, 5,20 x 10`4 M, 5,75 x 10'3 M, I50 değerleri ise, 1,66 x 10`3 M, 1,71 x 10'3 M, 1,56 x 10'3 M, 4,74 x 10'4 M,2,35 x 10~3 M bulunmuştur. CA-II izoenzimi için ise aynı bileşiklerin ortalama Kj değerleri sırasıyla 3,06 x 10`3 M, 1,39 x 10`3 M, 3,02 x 10`3 M, 7,30 x 10`4 M, 3,39 x 10`3 M, I50 değerleri de 2,80 x 10'3 M, 1,49 x 10-3 M, 3,68 x 10`3 M, 7,20 x 10'4 M, 3,84 x 10`3 M olarak belirlenmiştir.Bu değerler, dalapon pestisitinin hem sığır hem de insan eritrosit CA'lannın çalışılan bileşikler arasında en kuvvetli inhibitörü olduğunu göstermektedir. In this study, the inhibitory effects and inhibition kinetics of some pollutants and caffeine on bovine and human erythrocyte carbonic anhydrases (CA) were investigated.At first, the enzymes were purified from the hemolysates by affinity chromatography and all of the investigations were realized with these enzymes. The activities of human CA-I and CA-n were discriminated by selective inhibition of CA-I by bromopyruvate.Caffeine, NaClC>3, Na2Cr20y, trichloracetic acid (TCA), alachlor, carboxin, chloridazon, dalapon, dichlorvos, dnoc, metalaxyl and propoxur were tested for inhibitor. For the compounds having inhibitory effects, Kf and I50 values werecalculated from Lineweaver-Burk and % activity - [I] plots respectively. All of the inhibitions were found to be noncompetetively.Cafeine, NaClC>3, Na2Cr20y, TCA, dichlorvos and dalapon inhibited bovine erythrocyte CA remarkebly. For these, the average Kj values were 1.69 x 103` M, 5.07 x 103' M, 3.35 x 104- M, 4.78 x 103` M, 5.28 x 103` M, 1.22 x 105' M, and I50concentration 2.15 x 103_ M, 4.70 x 103~ M, 3.01 x 10^` M, 3.62 x 103` M, 3.81 x 103' M, 1.62 x 10^~ respectively.Caffeine, NaC103, TCA, dalapon and dichlorvos noncompetetively inhibited both human CA-I and CA-II for human CA-I, the avarage Kj values of these compounds were found to be 1.58 x 103' M, 1.73 x 103~ M, 1.69 x 103~ M, 5.20 x 10^` M, 5.75 x 103_ M, and I50 concentrations 1.66 x 103` M, 1.71 x 103` M, 1.56 x 103~M, 4.74 x 10^' M, 2.35 x 10'3 M respectively. The average Kj_ values of the same compounds, for human CA-II were 3.06 x 103` M, 1.39 x 103_ M, 3.02 x 103` M, 7.30 x 10^` M, 3.39 x 103~ M, and I50 concentrations 2.80 x 103~ M, 1.49 x 103_M, 3.68 x 103' M, 7.20 x lCH-- M, 3.84 x 103- M respectively. These findings show that dalapon is the most effective inhibitor among the investigated compounds of the bovine and human erythrocyte CA's. 103 |
