ANALYSIS OF PRIMARY HUMAN CELL CULTURES ISOLATED FROM ANTERIOR LENS CAPSULES OF PATIENTS WITH CATARACT
| Autor: | Haykin, Vasil |
|---|---|
| Přispěvatelé: | Доц. д-р Александър Хуго Оскар,дм, Assoc. prof. Alexander Oscar, MD,PhD |
| Jazyk: | bulharština |
| Rok vydání: | 2021 |
| Popis: | Цел: Изолиране и поддържане на първични човешки лещено епителни клетки (ЛЕК) от експланти от предна лещена капсула при възрастово обусловена и при диабет тип 2 (ЗД2) индуцирана катаракта и изследване и сравнение на основните им клетъчно-физиологични характеристики. Материал: Изследвани са 176 експланти с прилежащите лещено-епителни клетки: 148 при възрастово обусловена катаракта и 28 при ЗД2. Методи: получаване на експлант, суправитално обагряне, получаване и пасажиране на ЛЕК, фазовоконтрастна микроскопия, цитохимично белязане, имунофлуоресцентно маркиране, стимулация с TGFβ2, siRNA-медиирано заглушаване на ендогенната каталитична субединица(α) на СК2, флуоресцентно оцветяване на ЛЕК, микроскопски и статистически анализи. Резултати: Миграцията на ЛЕК при възрастово обусловена катаракта започна на 5-7 ден, а при ЗД2 на 8-10. 70% клетъчна плътност при ЗД2 се достигна със 7 дни по-късно. Колониите при ЗД2 бяха трикратно по-малко. ЛЕК при ЗД2 са с по-ниска пролиферативна активност. При 60% от ЛЕК при ЗД2 настъпи in vitro начална промяна на епителния фенотип във фибробластоподобен. Установи се корелация на TGF-β2 индуцираното повишено фосфорилиране на ERK1/2 с експресията на αSMA. Най-високо ниво на оксидативен стрес се установи при ЛЕК от ЗД2. Заключение: ЛЕК при ЗД2 имат по-слаба миграционна, пролиферативна и клоногенна активности. СК2 регулира ERK1/2, независимо от растежният фактор TGFβ2. Основна причина за формиране на катаракта е увреждането на лещата от свободни радикали Aim: Isolation and maintenance of primary human lens epithelial cells (LEC) from anterior lens capsule explants in age-related and type 2 (DM2) induced cataracts and study and comparison of their main cell-physiological characteristics. Material: 176 explants with adjacent lens-epithelial cells were examined: 148 in age-related cataracts and 28 in DM2. Methods: explant preparation, supravital staining, LEC preparation and passage, phase contrast microscopy, cytochemical labeling, immunofluorescence labeling, TGFβ2 stimulation, siRNA-mediated attenuation of the endogenous catalytic subunit of CK2, fluorescent staining of LEC, microscopic and statistical analyzes.. Results: The migration of LEC in age-related cataracts started at 5-7 days, and in DM2 at 8-10. 70% cell density in DM2 was reached 7 days later. The colonies in DM2 were three times smaller. LEK in DM2 have lower proliferative activity. In 60% of LEC in DM2 an initial change of the epithelial phenotype to fibroblast-like occurred in vitro. A correlation of TGF-β2-induced increased phosphorylation of ERK1/2 with αSMA expression was found. The highest level of oxidative stress was found in LEC from DM2. Conclusion: LEC in DM2 have reduced migratory, proliferative and clonogenic activities. CK2 regulates ERK1/2, independent of growth factor TGFβ2. The main reason for the formation of cataracts is damage to the lens by free radicals. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|