Development of Antigen ELISA for Detecting Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus from Tick Samples
| Autor: | Berber, Engin, Çanakoğlu, Nurettin |
|---|---|
| Jazyk: | turečtina |
| Rok vydání: | 2020 |
| Popis: | Kırım-Kongo Kanamalı Ateşi Hastalığı (KKKAH) Asya, Avrupa ve Afrika kıtasından yaygınolarak görülen ve ölümlere sebep olan zoonotik bir hastalıktır. Hastalığa neden olan etkenOrthonairovirus genusunda yer almakta olup keneler primer bulaş kaynağı olarak roloynamaktadır. Özellikle Hyalomma marginatum cinsi keneler hastalığın yayılmasında önemlibir rol oynamaktadır. Endemik bölgelerde kene popülasyonlarında virüs sirkülasyonununsaptanması hastalığın epidemiyolojisinde ve coğrafi dağılımının belirlenmesinde oldukçakritiktir. Bu çalışmada KKKAH virüsünün kene örneklerinde saptanması amacı ile antijenELISA testi geliştirilmesi hedeflenmiştir. Bu amaçla inaktif KKKA-Turkey/Kelkit/08 suşu iletavşanlara poliklonal serum elde etmek amacı ile ikişer hafta aralıklarla dört kezimmunizasyon yapılmış ve toplanan serumların titresi ELISA ile belirlenmiştir. En yüksektitredeki serumlar protein A/G affinite kolonlarından pürifiye edilmiş ve yakalayıcı antikorolarak kullanılmak üzere standardize edilmiştir. Detektör antikor olarak KKKATurkey/Kelkit/08 suşu NP proteinine karşı geliştirilmiş monoklonal antikor kullanılmıştır.Testin standardizasyonu ve validasyonu amacıyla endemik bölgelerden toplanan keneörnekleri dondur-çöz işleminden sonra PBS içerisinde sulandırılarak ticari kit (VectorBest,Rusya) ile pozitif ve negatif örnekler belirlendikten sonra PZR ile doğrulamaları yapılmış 58pozitif 65 negatif örnek geliştirilen antijen ELISA ile test edilmiştir. Testin özgüllüğü %99,duyarlılığı %92 olarak belirlenmiştir. Testin deteksiyon limitinin belirlenmesi amacı ilepozitif kene örnekleri real-time PZR ile test edilmiş ve sonuçlar ΔCt ve kopya sayısı olarakkarşılaştırılmıştır. Sonuçlara göre testin deteksiyon limiti 3.2 x 104 olarak belirlenmiştir.Çalışma neticesinde sahadan kene örneklerinde KKKAH virüsünün kolaylıkla saptanabilmesiiçin ucuz ve güvenilir bir test geliştirilmiştir. Crimean-Congo Hemorrhagic Fever (CCHF) is an emerging zoonotic disease prevlent inAsia, Europe and Africa. Causative agent is replaced in genus Orthonairovirus andtransmitted primarily through ticks. Especially Hyalomma marginatum is the primary vectorfor transmitting the disease. Evaluating the virus circulation in endemic areas is crucial forunderstanding the epidemiological aspects and geographical distrubition of disease. In thisstudy we aimed to develop an antigen ELISA method for detecting CCHF virus fromcollected tick samples. For this purpose inactive CCHF-Turkey-Kelkit/08 have been used forrabbit immunization and polyclonal sera have been collected. Serum samples used in ELISAfor detecting the serum antibody titers. Highest titer of antibody have been purified by usingprotein A/G column and used as capturing antibody. Anti CCHFV-NP monoklonal antibodieshave been used for detecting antibodies. Freze-thawed tick samples which have been collectedfrom endemic areas are used for validation and standardization of antigen ELISA. Positiveand negative tick samples have been determined by using commercial ELISA kit (VectorBest,Russia) and also confirmed by PCR. Total 58 positive, 65 negative samples tested with newlydeveloped antigen ELISA. Specifity and sensitivity of test have been measured %99 and %92respectively. Positive tick samples have been tested with real-time PCR and resultsnormalised both ΔCt and copy number. Detection limit of developed antigen ELISA havebeen measured as 3.2 x 104 copy number. In this study a cheap and reliable antigen ELISAhave been developed for diagnosis of CCHF virus in field. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
|