Investigation of the effect of oxytocin on mesenchymal stem cells exposed to sunitinib

Autor: Sofu, Meliz
Přispěvatelé: Uyanıkgil, Yiğit, Ege Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Kök Hücre Ana Bilim Dalı
Jazyk: turečtina
Rok vydání: 2021
Předmět:
Popis: Mezenkimal kök hücreler deneysel ve klinik çalışmalarda kullanılan önemli tedavi yöntemleridir. Günümüzde mezenkimal kök hücre tedavisi birçok hastalıkta uygulanmaktadır. Organ nakillerinden sonra kullanılan immünsupresif ilaç tedavisinin yanı sıra hastalarda mezenkimal kök hücre uygulaması da yapılmaktadır. Yapılan bu deneysel çalışmada organ nakillerinde immünsupresif amaçla kullanılan sunitinibin sıçan adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler üzerindeki sitotoksik etkilerinin araştırılması ve antioksidant özelliği olduğu bilinen oksitosinin bu toksisite üzerindeki etkileri gözlemlenmiştir. Adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler hattı ticari olarak temin edilmiştir. Yapılacak çalışmaların gerektirdiği doğrultuda, mezenkimal kök hücreler yeterli sayıya ulaşana kadar özel besiyeri içerisinde 37oC’de inkübe edilmiştir. Etken maddelerin sitotoksik etkileri WST-1 testi ile zaman ve doz bağımlı olarak değerlendirilmiştir. Canlılık ve proliferasyon analizleri ışık mikroskobu kullanılarak ve hücre sayımı yapılarak belirlenmiştir. BD Accuri C6 flow sitometri cihazı kullanılarak apoptoz ve hücre canlılığı değerlendirmeleri yapılmıştır. Biyokimyasal yöntemlerle lipit peroksidasyonu, glutatyon peroksidaz (GPx), katalaz (CAT) aktivitesi ve superoksit dismutaz (SOD) aktivitesi ölçülmüştür. Gruplara uygulanan ajanların sitotoksik dozları WST-1 testi ile değerlendirilmiştir. Anneksin V yöntemi ile nekrotik, erken apoptotik, geç apoptotik, toplam apoptotik ve canlı hücreler hem yüzde olarak hem de hücre/ml olarak hesaplanmıştır. Oksidatif stresle oluşan ve reaktif oksijen metabolitlerinin verdiği zararı belirlemek amacıyla lipit peroksidasyonu, glutatyon peroksidaz (GPx), katalaz (CAT) aktivitesi ve superoksit dismutaz (SOD) aktivitesi ölçülmüştür. Sıçan adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler için Sunitinib IC50 dozu (48. saat) için 44, 57 μM olarak hesaplanmıştır. Oksitosin için ise çalışılan dozlarda sitotoksik etki gözlemlenmemiştir. Bu yüzden en yüksek sabit doz olan 100 μM ile çalışmaya devam edilmiştir. BD Accuri C6 flow sitometri cihazı ile yapılan ölçümler ve yapılan hesaplamalar doğrultusunda kontrol grubundaki hücrelerde ölü hücre yüzdesi 1,03; canlı hücre yüzdesi 98,97 olarak hesaplanmıştır. Oksitosin grubundaki hücrelerde ölü hücre yüzdesi 2,59, canlı hücre yüzdesi 97,41 olarak hesaplanmıştır. Sunitinib grubunda erken apoptoz oranı %7,69; geç apoptoz oranı %4,31; ölü hücre %8,10; canlı hücre %79,90 olarak hesaplanmıştır. Sunitinib+Oksitosin kombine grup sonuçlarında ise erken apoptoz oranı %3,90; geç apoptoz oranı %1,34; ölü hücreler %7,81; canlı hücreler %25,5 olarak ölçülmüştür. Biyokimyasal bulgular ise MDA düzeylerinde Kontrol grubu, GSH-Px düzeyleri açısından Sunitinib grubu, CAT düzeyleri açısından oksitosin grubunda değişiklik olmadığı için güven aralıkları diğer gruplara göre hesaplandı, SOD düzeyleri bakımından ise kontrol ile diğer üç grup arasında farklar anlamlı bulunurken, diğer gruplar arasında hiçbir ikili farklılık anlamlı bulunmadı. Tüm gruplar arası ikili farkların tümü istatistiksel olarak anlamlı olarak saptanmıştır (p
Mesenchymal stem cells are essential treatment methods used in experimental and clinical studies. Nowadays, mesenchymal stem cell therapy is used in many various diseases. In addition to immunosuppressive drug therapy used after organ transplants, a mesenchymal stem cell application can also be utilized in the patient's treatment. In this experimental study, the cytotoxic effects of Sunitinib drug, which is used for immunosuppressive purposes in organ transplants, on mesenchymal stem cells which is derivated from adipose tissue and the toxicity effect on oxytocin (known to have antioxidant properties) were inspected. A mesenchymal stem cell line derived from mouse adipose tissue was commercially available. In line with the work to be done, stromal stem cells were incubated at 37°C in a special medium until they reached a sufficient number. The cytotoxic effects of the active ingredients were evaluated using the WST-1 assay in a time and dose-dependent manner. Viability and prevalence analyze were determined using light microscopy and cell counting. Apoptosis and cell viability were assessed with a BD Accuri C6 flow cytometer analyzer. Lipid peroxidation, glutathione peroxidase (GPx), catalase activity (CAT), and superoxide dismutase (SOD) activity were measured by biochemical methods. The cytotoxic doses of agents applied to the groups were assessed by the WST-1 assay. Necrotic, early apoptotic, late apoptotic, total, and viable cells were calculated in both percentage and cell/ml by the Annexin V method. The effect of lipid peroxidation, glutathione peroxidase (GPx), catalase activity (CAT), and superoxide dismutase activity (SOD) was measured in order to determine the damage due to oxidative stress and reactive oxygen metabolites. The IC50 dose of Sunitinib in mesenchymal stem cells derived from adipose tissue of mice (48 h) was calculated as 44.57 μM. For oxytocin, no cytotoxic effect was observed at the studied doses. Therefore, the study continued with the highest stable dose of 100 μM. According to the measurements and calculations made with the BD Accuri C6 cellular device, the percentage of dead cells in cells in the control group was calculated at 1.03 and the percentage of live cells was 98.97. The percentage of dead cells in the cells in the oxytocin group was 2.59 and the percentage of live cells was 97.41. In the sunitinib group, the rate of early apoptosis was 7.69%, late apoptosis rate 4.31%, dead cells 8.10%, and live-cell 79.90%. In the results of the pooled Sunitinib + oxytocin group, the rate of early apoptosis was 3.90%, the rate of late apoptosis was 1.34%, the percentage of dead cells 7.81, and the percentage of live cells 25.5. As for the biochemical results, confidence intervals were calculated according to the other groups as there was no change in MDA levels in the control group, GSH-Px levels in the Sunitinib group, and CAT levels in the oxytocin group, and there was no significant difference between the groups. All marital differences between all groups were statistically significant (p
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: