Estandarización de las condiciones de un ensayo de oligonucleótidos ligados a enzimas (ELONA) para la detección de la proteína ROP18 de Toxoplasma gondii en suero de individuos con toxoplasmosis
| Autor: | Vargas Montes, Mónica |
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| Přispěvatelé: | Universidad del Quindío - Colombia - Director - Néstor Iván Cardona Perez, M.Sc. Dr. Sc. |
| Jazyk: | Spanish; Castilian |
| Rok vydání: | 2017 |
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| Popis: | La proteína ROP18 es uno de los principales factores de virulencia del parásito Toxoplasma gondii que contribuye con el fenotipo agudo de la infección en modelo murino. Hasta el momento, no se ha realizado la identificación de esta proteína en suero de personas con toxoplasmosis y no se conoce si podría relacionarse con la manifestación clínica de la enfermedad. El objetivo del estudio fue estandarizar las condiciones de un Ensayo de Oligonucleótidos Ligados a Enzimas (ELONA-Enzyme Linked Oligonucleotide Assay) con los aptámeros de ADN 2039 y 2056 para la detección de la proteína ROP18 en suero de personas con toxoplasmosis. 1. INTRODUCCIÓN 9 2. OBJETIVOS 13 2.1. Objetivo general 13 2.2. Objetivos específicos 13 3. ANTECEDENTES Y MARCO TEÓRICO 14 3.1. Generalidades de la biología de Toxoplasma gondii 14 3.2. Toxoplasmosis: transmisión y fisiopatología de la enfermedad 15 3.3. Respuesta inmune contra T. gondii 16 3.4. ROP quinasas de T. gondii: ROP18 17 3.5. Biomarcadores 19 3.6. Inmunoensayos: ELISA y ELONA 21 4. MATERIALES Y MÉTODOS 23 4.1 Estandarización del ensayo ELONA 24 4.1.1 Antígenos y moléculas de captura 24 4.1.2 Configuraciones evaluadas para la estandarización del ELONA 25 4.1.3 Condiciones a estandarizar en el ELONA directo 26 4.1.4 Condiciones a estandarizar en el ELONA tipo sándwich 30 4.2 Análisis in silico de los aptámeros anti-ROP18 32 4.2.1 Predicción de la estructura secundaria 32 4.2.2 Predicción de motivos y modelamiento tridimensional 32 4.2.3 Análisis de acoplamiento molecular de los aptámeros con ROP18 y otras proteínas control (PAK-1, MAPK-12 y ROP16) 33 4.3. Detección de la proteína ROP18 en la población de estudio 35 4.4. Análisis estadísticos 36 5. RESULTADOS 38 5.1. Estandarización del ensayo ELONA 38 5.1.1 Condiciones estandarizadas en el ELONA directo 38 5.1.2 Condiciones estandarizadas en el ELONA tipo sándwich: 49 5.2. Análisis in silico de los aptámeros anti-ROP18 52 5.2.1. Predicción de la estructura secundaria 53 5.2.2 Predicción de motivos y modelamiento tridimensional 54 5.2.3 Análisis de acoplamiento molecular de los aptámeros con ROP18 y otras proteínas control (PAK-1, MAPK-12 y ROP16) 58 5.3. Detección de la proteína ROP18 en la población de estudio 59 5.3.1 Descripción de asociaciones entre el ELONA-ROP18 positivo y las formas clínicas de toxoplasmosis 60 6. DISCUSIÓN 64 7. CONCLUSIONES 78 8. ASPECTOS BIOÉTICOS DE LA INVESTIGACIÓN 79 Maestría Magíster en Ciencias Biomédicas |
| Databáze: | OpenAIRE |
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