| Popis: |
Zbog svoje toksičnosti, histamin je jedan od najproučavanijih biogenih amina. Rana detekcija histamina u ribi i proizvodima od ribe nužna je kako bi se na vreme sprečilo histaminsko trovanje. Za njegovo određivanje najčešće se koristi tečna hromatografija visokih performansi (HPLC). Zbog složenosti pripreme uzorka i mogućeg gubitka prinosa analita, cilj ovog istraživanja je bilo poboljšanje HPLC metode optimizacijom koraka pripreme uzorka, a pod optimalnim uslovima su smatrani kod kojih su gubici prinosa najmanji. Sedam faktora koji mogu uticati na analitički prinos su najpre proučavani primenom Plaket-Burmanovog dizajna. Tada je utvrđeno da na anlitički prinos utiču faktori vezani za derivatizaciju histamina, a na odnos signala i šuma pored derivatizacionog koraka utiče i proces taloženja proteina. Nakon eliminacije faktora bez uticaja, tri faktora su dalje optimizovana primenom Centralnog složenog dizajna. Nakon postizanja optimalnih uslova urađena je validacija metode. Linearnost metode je prisutna u konc. opsegu (0-500 mg/kg), dok su vrednosti za limit detekcije (LOD) i limit kvantifikacije (LOQ) iznosile redom: 6,09 mg/kg i 20,30 mg/kg. Tačnost metode iskazana u formi analitičkog prinosa se kretala od 95,53% do 98,82% za tri koncentraciona nivoa. Preciznost iskazana kroz granice ponovljivosti i unutarlaboratorijske reproduktivnosti se kretala na tri koncentraciona nivoa u opsezima: 12,00 – 16,89 mg/kg, i 5,26 – 29,57 mg/kg, redom. Utvrđeno je da metoda u pogledu linearnosti, LOD, LOQ tačnosti i preciznosti zadovoljava vrednosti propisane standardom, pri tome se optimizovanom metodom značajno skraćuje vreme pripreme uzorka sa standardnih 60 minuta na 25 min, dok su koncentracije pojedinih reagenasa značajno redukovane. |
