| Popis: |
Bakalaureusetöö Loomakasvatuse õppekaval Vitrifikatsioon on embrüote külmutamiseks väga edukas krüopreservatsiooni meetod. Üha uusi katseid viiakse läbi vitrifikatsioonimeetodite arendamiseks avastamaks, millistes tingimustes vitrifikatsioon kõige edukam on. Töö eesmärgiks on leida vitrifikatsiooniks kõige optimaalsem veise in vitro toodetud embrüo arengujärk ja krüopreservatsiooni lahus embrüote külmutamiseks. Käesolevas töös on kasutatud lisaks autori katsetulemustele võrdluseks ka Shirazi (2008), Taniguchi (2007), Van Huong Do (2017) ja teiste uurimistöid. Katsetes kasutati vitrifikatsiooniks nelja erinevat protokolli: (1) Bioscience lahustega külmutamine etüleenglükooli ja DMSO (dimetüülsulfoksiid) baasil, (2) IMV Technologies etüleenglükooliga külmutamine etüleenglükooli baasil, (3) etüleenglükooliga vitrifikatsioon etüleenglükooli ja DMSO baasil ning (4) IMV Technologies glütserooliga külmutamine glütserooli baasil. Pärast sulatamist hinnati veise embrüote elujõulisust ja arengut pärast 24 h kultveerimist. Katsete tulemusel leiti, et kõige edukam oli veise embrüote külmutamine laienenud blastotsüsti arengufaasis (22% juhtudel elujõulised embrüod) võrreldes blastotsüsti (20%) ja koorunud blastotsüsti (6%) arengufaasidega. Lisaks leiti, et kõige paremad vitrifikatsioonilahused veise embrüote külmutamisel baseeruvad etüleenglükoolil ja DMSO-l, andes paremaid embrüote ellujäämuse tulemusi pärast sulatamist (32% ja 68%) võrreldes etüleenglükooli (9%) ja glütserooli baasil vitrifikatsiooni lahustega (0%). Antud alal varem läbi viidud katsete erinevused tulenevad liiga paljude faktorite varieeruvusest – kasutatud on erinevaid lahuseid ja abivahendeid. Lühikese kestvusega külmutuskatsed, nagu käesolevas töös, annavad ülevaate embrüo esialgse elujõulisuse kohta. Lisaks tuleks katseid pikendada embrüosiirdamise- ja elussündide tulemuste saamiseks Vitrification is a successful cryopreservation method. A lot has been done to improve vitrification, but it can be more successful in the future. The aim of this study is to find which developmental stage is the most optimal to vitrify bovine embryos successfully and which cryopreservation solutions have the highest embryo survival rate. Shirazi (2008), Taniguchi (2007), Van Huong Do (2017) and other research studies were used in this thesis to find the right developmental stage of bovine embryos, cryopreservation solutions that are the most effective for successful vitrification and to compare the results. Four cryopreservation protocols were used in this thesis: (1) Bioscience solutions based on ethylene glycol and DMSO (dimethyl sulfoxide); (2) IMV Technologies ethylene glycol vitrification based on ethylene glycol; (3) Ethylene glycol vitrification based on ethylene glycol and DMSO; and (4) IMV Technologies glycerol vitrification based on glycerol. Survival rates were observed after 24 h following thawing process. In the present study, it was found that the best developmental stage for bovine embryo vitrification is expanded blastocyst stage (survival rate 22%), compared to blastocyst stage (20%) and hatched blastocyst stage (6%). In addition, the results show higher bovine embryo survival rate with vitrification solution based on ethylene glycol and DMSO (32% and 68%) compared to the ethylene glycol based (9%) and glycerol based solution (0%). Previous researches and present study tests show, that this field of study requires further investigations, because the results differ greatly from each other – previous researches this study is based on used different solutions and means of freezing. Short cryopreservation experiments, like in this study, give initial results, but they may not be accurate enough. Therefore experiments should last longer, up to embryo transfer and live births |
