EVALUACIÓN DE DOS MÉTODOS DE CRIOPRESERVACIÓN DE EMBRIONES DE LLAMAS SOBRE LAS TASAS DE SUPERVIVENCIA in vivo e in vitro

Autor: Vásquez E., Martha, Cueva M., Sergio, Cordero R., Aida, Gonzales C., Mario Lino, Huanca L., Wilfredo
Jazyk: Spanish; Castilian
Rok vydání: 2011
Předmět:
Zdroj: Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú; Vol. 22 No. 3 (2011); 190-198
Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú; Vol. 22 Núm. 3 (2011); 190-198
Revistas Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
instacron:UNMSM
ISSN: 1682-3419
1609-9117
Popis: The aim of the study was to evaluate in llama embryosthe effect of twocryopreservation methods on the in vivo and in vitro survival rate. Seventy three hatchedblastocysts were recovered by a non-surgical technique at day 6.5 after mating fromsuperstimulated llamas. Receptors were randomly allocated to a control group (n=14),vitrification (n=30) and slow freezing (n=29). On vitrification, embryos were exposed to avitrification solution (VS) containing 20% Glycerol + 20% Ethylene glycol + 0.5 M Sucrose+ 10% fetal calf serum (FCS) + 50 μg/ml gentamicin sulfate, and then plunged into liquidnitrogen in 0.25 ml straws. On the slow freezing, embryos were exposed to phosphatebuffer saline (PBS) with 1.5 M Ethylene glycol + 10% FCS + 50 μg/ml gentamicin sulfate,loaded in 0.25 ml straws, and cooled at a rate of 0.12 °C/min to 5 °C. Then, furthertemperature decrease at 5 °C /min rate, to -20 °C, for 5 min at the mouth of the nitrogentank; finally straws were plunged into liquid nitrogen. For thawing, two dilution solutionswere used composed of two sucrose concentrations: 0.5 M and 0.2 M for slow freezing,and 0.25 M and 0.12 M for vitrification. An in vivo evaluation was performed in allembryos of the control group and in 50% of the experimental groups by direct transferinto previously synchronized female recipients. Pregnancy diagnosis was carried out bytransrectal ultrasound evaluation at 20 and 30 days. Pregnancy was in 4/13, 2/12, and 0/11 in recipients from control, vitrification and slow freezing groups respectively, withoutsignificant difference. For the in vitro evaluation cryopreservated embryos were culturedin PBS + 20% FCS under atmosphere compose of 5% CO2, 20% O2, and 75% N2 at 39 °C for1 h, then reexpansion was recorded by morphological characteristics. Embryo reexpansionwas 75% (9/12) in vitrified embryos and 57.1% (4/7) in slow freezing embryos, and withoutsignificant difference. It was concluded that vitrification could be a suitable method forllama embryo cryopreservation. El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de dos métodos de criopreservación sobre la supervivencia in vivo e in vitro de embriones de llama. Se recuperaron 73 embriones en estadio de blastocisto eclosionado mediante una técnica no quirúrgica a los 6.5 días post servicio en llamas superestimuladas. Las llamas receptoras se distribuyeron aleatoriamente en grupo Control (n = 14), de vitrificación (n=30) y de congelación lenta (n=29). Para la vitrificación, los embriones fueron expuestos a la solución de vitrificación (SV) conteniendo 20% Glicerol + 20% Etilenglicol + 0.5M Sucrosa + 10% suero fetal bovino (SFB) + 50 μg/ml sulfato de gentamicina, y sumergidos en nitrógeno líquido dentro de pajillas de 0.25 ml. Para la congelación lenta, los embriones fueron expuestos a fosfato buffer salino (PBS) con 1.5 M de Etilenglicol + 10% de SFB + 50 μg/ml de sulfato de gentamicina, aspirados en pajillas de 0.25 ml, y enfriados a una tasa de descenso de 0.12 °C/min hasta 5 °C y, luego, en la boca del tanque de nitrógeno, se continuó el descenso a una tasa de 5 °C /min hasta -20 °C por 5 min, y luego se sumergieron en el nitrógeno líquido. En la descongelación se utilizaron soluciones de dilución conteniendo dos concentraciones de sucrosa: 0.5 M y 0.2 M para congelación lenta y 0.25 M y 0.12 M para vitrificación. Se realizó una evaluación in vivo a todos los embriones del grupo control y al 50% de los embriones de los dos grupos experimentales, mediante transferencia directa a hembras receptoras previamente sincronizadas. El diagnóstico de preñez se llevó a cabo por ecografía transrectal a los 20 y 30 días. La preñez fue de 4/13, 2/12 y 0/11 para las receptoras de los grupos Control, Vitrificados y Congelación lenta, respectivamente, sin diferencia estadística. Para la evaluación in vitro, los embriones criopreservados fueron cultivados en PBS + 20% SFB, en una atmósfera compuesta por 5% de CO2, 20% de O2 y 75% de N2, durante 1 h a 39 °C, y se observó su re-expansión mediante la observación de su morfología. Se obtuvo 75.0% (9/12) de re-expansión en embriones vitrificados y 57.1% (4/7) en embriones congelados lentamente (4/7), sin diferencia significativa. Los resultados permiten concluir que la vitrificación podría ser el método adecuado para la criopreservación de embriones de llama.
Databáze: OpenAIRE
Externí odkaz: