Desenvolvimento e validação de metodologia multirresíduos por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas para análise de fluorquinolonas em músculo e rim de frangos

Autor: Diego Gomes Rocha
Přispěvatelé: Adriana Ferreira Faria, Rodinei Augusti, Renata Pereira Lopes Moreira, Helvecio Costa Menezes
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2014
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFMG
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
instacron:UFMG
Popis: Este trabalho envolveu a otimização e a validação de dois métodos para determinação de fluorquinolonas em matrizes de músculo e rim de frango, sendo elas: ácido nalidíxico, ácido oxolínico, ácido pipemídico, danofloxacina, difloxacina, ciprofloxacina, enrofloxacina, flumequina, marbofloxacina, norfloxacina, ofloxacina e sarafloxacina. O procedimento de extração empregado para ambos as metodologias validadas foi um método QuEChERS, cuja otimização para extração de 2,000g de amostra baseou-se no uso de um planejamento fatorial Box-Behnken 33, com avaliação estatística realizada por ANOVA. Foi utilizada como fase extratora 10,0 mL de acetonitrila acidificada com 5% de ácido acético glacial para rim de frango, e, para a matriz músculo, empregou-se 10,0 mL de uma mistura da composição da fase extratora anterior com água ultrapurificada (80:20 %v/v). A etapa de clean-up foi feita por extração em fase sólida dispersiva, empregando-se 50,0 mg de uma mistura dos sorventes C18 e PSA (50:50 % m/m). O primeiro método validado envolveu o uso da técnica LC-MS/MS para separação, identificação e quantificação dos doze analitos, avaliando-se cada fluorquinolona por uma transição de massas para confirmação e outra para quantificação, pelo modo multiple reaction monitoring. As figuras de mérito avaliadas durante a validação apresentaram bons desempenhos, avaliando-se a veracidade (recuperações acima de 88,5%), linearidade (R2 > 0,931), precisão (coeficientes de variação menores que 12,3%), seletividade, além da obtenção de baixos valores de incertezas expandidas. O segundo método validado empregou a técnica de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas de alta resolução, com a identificação e quantificação de nove fluorquinolonas, no modo single ion monitoring. As figuras de mérito avaliadas também se mostraram satisfatórias, com recuperações acima de 87,0%, coeficientes de determinação maiores que 0,960, coeficientes de variação menores que 8,7%, além de boa seletividade e baixos valores de incerteza expandida. Os dois métodos foram estatisticamente comparados, usando-se o teste t de Student não-pareado e com variância agrupada, ao nível de confiança de 95%, e não apresentaram diferença significativa. This work involved the optimization and validation of two methods for determining fluoroquinolones in samples of muscle and kidney of chicken: nalidixic acid, oxolinic acid, pipemidic acid, danofloxacin, difloxacin, ciprofloxacin, enrofloxacin, flumequine, marbofloxacin, norfloxacin, ofloxacin and sarafloxacin. The QuEChERS extraction procedure was used for both methods, whose optimization for extraction of 2.0000 g of the sample was based on the use of a Box- Behnken factorial design 33 with statistical evaluation by ANOVA. As extraction phase it was used 10.0 mL of acetonitrile acidified with 5 % glacial acetic acid to chicken kidney, and to chicken muscle it was employed a mixture of 10.0 mL of the previous extraction phase with ultrapure water (80:20 % v/v). The clean-up step was performed by dispersive solid phase extraction, using 50.0 mg of a mixture of C18 and PSA sorbent (50:50 % m/m). The first validated method involved the use of LC-MS/MS technique for separation, identification and quantification of the twelve analytes by evaluating each fluoroquinolone using a transition mass for confirmation and another for quantification by multiple reaction monitoring mode. The figures of merit measured during validation showed good performance, evaluating accuracy (recoveries above 88.5%), linearity (R2 > 0.931), precision (coefficient of variation less than 12.3%), besides appropriate selectivity and low values of expanded uncertainties. The second validated method employed the high performance liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry technique, in which the identification and quantification of nine fluoroquinolones was performed in the single ion monitoring mode. The figures of merit were also evaluated as satisfactory, with recoveries above 87.0%, coefficients of determination higher than 0.960, coefficients of variation less than 8.7%, and good selectivity and low values of expanded uncertainty. The two methods were statistically compared using the unpaired t Student test and pooled variance, at the confidence level of 95 %, and showed no significant difference.
Databáze: OpenAIRE
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