Análise de biomarcadores da matriz extracelular do coração de camundongos tratados com isoproterenol
| Autor: | Ricardo Cambraia Parreira |
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| Přispěvatelé: | Rodrigo Ribeiro Resende, Carlos Delfin Chavez Olortegui, Gregory Thomas Kitten |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2015 |
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| Zdroj: | Repositório Institucional da UFMG Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) instacron:UFMG |
| Popis: | A hipertensão está associada a altas taxas de morbidade e mortalidade na população mundial. Os elevados níveis de pressão sanguínea produzem um intenso estresse tecidual, uma condição progressiva para o desenvolvimento de hipertrofia que compromete a eficiência cardíaca. Os biomarcadores existentes para predizer lesões do miocárdio não são capazes de demonstrar outras consequências resultantes dos processos patológicos lesivos, como hipertrofia, inflamação e isquemia e, por isso é necessário a identificação de marcadores que sejam mais específicos às condições estudadas. Com o intuito de encontrar tais marcadores que possam indicar uma situação de hipertrofia cardíaca, desenvolveu-se um modelo animal dessa condição por meio da administração de isoproterenol. Nesse modelo os miócitos murinos são induzidos à apoptose e os fibroblastos aumentam sua produção de colágeno e deposição de proteínas da matriz extracelular, alterando assim o perfil proteico. Para determinação desse perfil, realizou-se um processo de enriquecimento de proteínas denominado descelularização que remove o conteúdo celular e seus remanescentes nucleares, mas mantendo a integridade da matriz. Após o processo de enriquecimento utilizou-se a técnica de phage display para determinar a diversidade peptídica presente no tecido cardíaco hipertrófico. Nossos resultados demonstram hipertrofia cardíaca devido ao aumento do peso do coração em relação ao peso corporal e comprimento da tíbia, assim como alterações na frequência cardíaca e pressão arterial condizentes com o uso de isoproterenol. O processo de descelularização teve sua eficiência demonstrada pela quantidade mínima de conteúdo de DNA presente no tecido e pela visualização por meio de histologia e microscopia eletrônica da integridade da matriz destituída de conteúdo celular. A realização do phage display permitiu a seleção de peptídeos específicos presentes no músculo cardíaco hipertrófico. Em seguida, obteve-se o sequenciamento dessas moléculas de DNA que codificaram os peptídeos expressos na superfície dos fagos. Essa abordagem abre perspectivas para a descoberta de marcadores que podem predizer o desenvolvimento da condição patológica de hipertrofia. Hypertension is associated with high morbidity and mortality rates in the world population. High levels of blood pressure produce intense stress tissue, a progressive condition for the development of cardiac hypertrophy, which affects the efficiency of the heart. The existing biomarkers to predict myocardial lesions are not able to show other harmful consequences resulting from pathological processes such as hypertrophy, ischemia and inflammation, and therefore identification of markers that are more specific to the conditions studied is required. In order to find such markers that may indicate a cardiac hypertrophy situation, we used mice model for this condition which had received isoproterenol. In this model, the myocytes from those mices were induced to apoptosis, and fibroblasts had increased collagen production and extracellular matrix proteins deposition, so modifying protein profile. We used a procedure called decellurarization to determina protein profile. This procedure leads to an enrichment of protein contents by removing cell content and its nuclear remnants, while maintaining matrix integrity. After the enrichment procedure, phage display technique was used to determine the diversity of peptide present in hypertrophic cardiac tissue. Our results demonstrated that cardiac hypertrophy due to an increase in heart weight compared to the body weight and tibia´s length, as well as changes in heart rate and blood pressure were consistent with the administration of isoproterenol. The decellularization process had its efficiency demonstrated by the minimal amount of DNA content present in tissue and by browsing through histology and electron microscopy of cell integrity devoid of matrix content. After 3 rounds of selection using phage display technique specific peptides were identified in the hypertrophic heart muscle matrix. Then, we have obtained the DNA sequencing of those peptides which were expressed on phage surface. This approach opens up prospects for the discovery of markers that can predict the development of the pathological condition of hypertrophy. |
| Databáze: | OpenAIRE |
| Externí odkaz: |
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