Efeito da terapia fotodinâmica associada a zincoporfirinas sobre Leishmania braziliensis
| Autor: | ANDRADE, Camila Galvão de |
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| Přispěvatelé: | CARVALHO JÚNIOR, Luiz Bezerra de, FONTES, Adriana |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2018 |
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| Zdroj: | Repositório Institucional da UFPE Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) instacron:UFPE |
| Popis: | CAPES A Leishmaniose é uma doença causada por protozoários do gênero Leishmania. A terapia atual enfrenta desafios relacionados à presença de efeitos colaterais e desenvolvimento de resistência. A terapia fotodinâmica (TFD) está emergindo como uma potencial modalidade terapêutica para Leishmaniose Cutânea. Neste trabalho, foi avaliado o efeito fotodinâmico das Zn(II) meso-tetrakis(N-alquilpiridinio-2-il)porfirinas ZnTE-2-PyP⁴⁺ e ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ sobre Leishmania braziliensis. Promastigotas foram incubadas com a ZnTE-2-PyP⁴⁺ (5 ou 10 μM) durante 10 min. As amostras foram irradiadas com LED (300 mW/cm2) por 5 ou 10 min. Um protocolo semelhante foi também utilizado para amastigotas. Os efeitos fototóxicos induzidos nas promastigotas foram analisados através da contagem celular em câmara de Neubauer, marcação com iodeto de propídio (IP) e rodamina 123 (Rh 123) por citometria de fluxo e microscopias eletrônicas de transmissão e varredura (MET e MEV). A citotoxicidade relacionada ao tratamento foi avaliada em células de mamíferos (células VERO, macrófagos J774 e células de exsudato peritoneal de camundongos BALB/c). Promastigotas foram também incubadas com a ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ (5 ou 10 μM) durante 10 min, seguido de irradiação por 2 ou 5 min. O dano celular foi avaliado através da contagem celular, marcação com IP e Rh 123, além da microscopia de contraste de fase. Os resultados demonstraram que o tratamento fotodinâmico associado a zincoporfirinas foi capaz de induzir dano celular em mais de 90% das promastigotas, sendo um maior número de células afetadas quando o fotossensibilizador ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ foi utilizado. O tratamento com a ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ + luz apresentou toxicidade superior a induzida pela ZnTE-2-PyP⁴⁺ + luz frente às células de mamífero. A marcação com IP sugere que ambas as zincoporfirinas + luz provocam a perda da integridade da membrana celular do parasita. Quanto ao potencial de membrana mitocondrial, observou-se hiperpolarização nas células tratadas com ZnTE-2-PyP⁴⁺+ luz e despolarização acentuada nas células tratadas com ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ + luz. As avaliações ultraestruturais de promastigotas após o tratamento fotodinâmico associado a ZnTE-2-PyP⁴⁺indicaram danos como perda de material citoplasmático, surgimento de vacúolos, enrugamento da membrana plasmática e redução do volume celular. O número de amastigotas no interior dos macrófagos foi reduzido em cerca de 40% após a aplicação da ZnTE-2-PyP⁴⁺+ luz. Os resultados obtidos permitem apontar a TFD associada a zincoporfirinas como uma alternativa promissora para terapia da Leishmaniose Cutânea. Leishmaniasis is a disease caused by protozoa of the genus Leishmania. Current therapy faces challenges related to the presence of side effects and development of resistance. Photodynamic therapy (PDT) is emerging as a therapeutic modality for Cutaneous Leishmaniasis. In this work, we evaluated the photodynamic effect of the Zn(II) meso-tetrakis(N-alkylpyridinium-2-yl)porphyrins ZnTE-2-PyP⁴⁺ and ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ zinc porphyrins on Leishmania braziliensis. Promastigotes were incubated with ZnTE-2-PyP⁴⁺ (5 or 10 μM) for 10 min. The samples were irradiated with LED (300 mW/cm2) for 5 or 10 min. A similar protocol was also used for amastigote forms. The phototoxic effects induced in promastigotes were evaluated by cell counting in Neubauer chamber, flow cytometry labeling with propidium iodide (PI) and rhodamine 123 (Rh 123) and transmission (TEM) and scanning electron microscopy (SEM). The cytotoxic related to the treatment was evaluated in mammalian cells (VERO cells, J774 macrophages and peritoneal exudate cells from BALB/c mice). Promastigotes were also incubated with ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ (5 μM or 10 μM) for 10 min, followed by irradiation for 2 or 5 min. Cell damage was assessed by cell counting, IP and Rh 123 labeling, and phase contrast microscopy. The results demonstrated that PDT associated with zinc porphyrins was able to induce cellular damage in more than 90% of the promastigotes, and the highest percentage of cells were affected when ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ was used as the photosensitizer. Treatment with ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ + light showed greater toxicity to mammalian cells than that induced by ZnTE-2-PyP⁴⁺ + light. Labeling with IP suggests that both zinc porphyrins + light caused loss of cell membrane integrity. Regarding to mitochondrial membrane potential, a hyperpolarization was observed in cells treated with ZnTE-2-PyP⁴⁺ + light and an accentuated depolarization in cells treated with ZnTnHex-2-PyP⁴⁺ + light. The ultrastructural evaluation of promastigotes after PDT associated with ZnTE-2-PyP⁴⁺ indicated damage such as loss of cytoplasmic material, presence of vacuoles, plasma membrane wrinkling, and cell volume reduction. The amount of amastigotes within the macrophages was reduced by about 40% after application of PDT associated with ZnTE-2-PyP⁴⁺ + light. The results obtained allow us to point out PDT associated with zinc porphyrins as a promising alternative for cutaneous Leishmaniasis therapy. |
| Databáze: | OpenAIRE |
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