Performance of semen viability, modified semen plasma agglutination, microscopic agglutination tests, PCR, and sequencing in the diagnosis of leptospirosis in semen and serum of bovine bulls

Autor: Maiolino, Sérgio Ricardo
Přispěvatelé: Universidade Estadual Paulista (Unesp), Ribeiro, Márcio Garcia [UNESP]
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2019
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UNESP
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
instacron:UNESP
Popis: Submitted by Sérgio Ricardo Maiolino (srmaiolino@gmail.com) on 2020-01-09T17:48:08Z No. of bitstreams: 1 TESE - VERSÃO FINAL.pdf: 668783 bytes, checksum: e1e4061d0d4f681c42b9d1e0a33732f0 (MD5) Approved for entry into archive by ROSEMEIRE APARECIDA VICENTE null (rose@btu.unesp.br) on 2020-01-20T20:45:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 maiolino_sr_dr_bot.pdf: 668783 bytes, checksum: e1e4061d0d4f681c42b9d1e0a33732f0 (MD5) Made available in DSpace on 2020-01-20T20:45:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maiolino_sr_dr_bot.pdf: 668783 bytes, checksum: e1e4061d0d4f681c42b9d1e0a33732f0 (MD5) Previous issue date: 2019-11-22 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A leptospirose permanece como uma das zoonoses mais prevalentes de origem bacteriana em todo o mundo, particularmente em países de clima tropical. Devido às características peculiares das leptospiras, a doença é negligenciada ou subdiagnosticada em animais de produção. A maioria dos estudos com bovinos têm focado a doença apenas em vacas. Neste cenário, em virtude dos riscos de infecção do trato reprodutivo de touros e da eliminação do patógeno pelo sêmen, o presente estudo investigou a soroaglutinação microscópica (SAM) com antígenos vivos em 203 touros bovinos adultos em idade reprodutiva, em regime de monta natural, sem sinais aparentes de orquite ou inflamação de glândulas acessórias. Simultaneamente, o sêmen dos touros foi submetido ao exame andrológico e a reação em cadeia pela polimerase (PCR) convencional utilizando o gene 16S rRNA. Resultados positivos na PCR convencional foram confirmados por sequenciamento. A sêmen plasma aglutinação (SPA) modificada foi realizada substituindo o soro sanguíneo pelo plasma seminal no teste da SAM. O ejaculado de oito (8/203=3,9%) touros foi considerado inapto à reprodução (necrospermia e azoospermia). Não foram identificadas aglutininas anti-Leptospira na SPA. Foi observada alta frequência (132/203=65%) de títulos na SAM, particularmente para sorovares do sorogrupo Sejroe, e.g., Hardjo CTG (100/203=49,3%), Wolffi (74/203=36,4%), Guaricura (72/203=35,5%) e Hardjoprajitno (56/203=27,6%). O sêmen de três (3/203=1,5%) touros foram positivos na PCR (16S rRNA), embora estes animais foram negativos na confirmação por PCR com os genes Lep1 e Lep2 e sequenciamento. A alta frequência de sorovares do sorogrupo Sejroe - adaptados a espécie bovina - indica a necessidade de realização de diagnóstico periódico e adoção de medidas de controle e profilaxia contra a leptospirose bovina, particularmente para evitar a transmissão entre os bovinos, os prejuízos econômicos caracterizados por distúrbios da esfera reprodutiva, bem como devido à preocupação em saúde pública. Na literatura consultada, o exame andrológico, a investigação de aglutininas anti-Leptospira no sêmen na SPA, e a confirmação de reações positivas na PCR convencional de sêmen utilizando o sequenciamento foram pesquisados, pela primeira vez, no diagnóstico da leptospirose em touros bovinos. Leptospirosis remains one of the most prevalent bacterial zoonosis worldwide, particularly among tropical countries. Due to the peculiar properties of leptospires, the diagnosis is neglected or unnoticed in livestock. Also, the majority of studies involving bovine leptospirosis have focused on the disease in cows. Given the considerable risk of infections in the reproductive tract of bulls and semen-shedding of leptospires, the present study investigated serum microscopic agglutination test (MAT) among 203 bovine bulls reproductively mature, in natural breeding of farms, without apparent signs of orchitis or inflammation of accessory reproductive glands. Simultaneously, the semen of all bulls was subjected to sperm viability analysis and conventional polymerase chain reaction (PCR) based on the gene 16S rRNA. PCR-positive results of semen samples were confirmed by sequencing. Modified seminal plasma agglutination (MSPA) test replacing blood serum of all bulls by plasma seminal in MAT was assessed as well. Eight (8/203=3.9%) semen bulls were considered improper for reproduction service (necrospermia and azoospermia). No agglutinins titers were identified among all bulls subjected to MSPA. High frequency (132/203=65%) of leptospiral agglutinins titers were identified at MAT, particularly to serovars from Sejroe serogroup, e.g., Hardjo CTG (100/203=49.3%), Wolffi (74/203=36.4%), Guaricura (72/203=35.5%), and Hardjoprajitno (56/203=27.6%). Three (3/203=1.5%) semen of bulls were positive to PCR 16S gene, whereas these animals were negative to confirmation by sequencing. The high frequency of serovars from Sejroe serogroup, which are adapted to bovine species, indicate the need for periodic diagnosis, in addition to prophylactic and control measures against the disease, particularly to avoid transmission of the pathogen bovine-to-bovine, economic losses related to a xiii reproductive failure caused by leptospires, and public health issue of the disease. To our knowledge, semen viability analysis, the investigation of anti-Leptospira antibodies by modified seminal plasma agglutination, and sequencing as confirmation test of semen PCR-positive were assessed for the first time on the diagnosis of leptospirosis in bovine bulls. CAPES: 001
Databáze: OpenAIRE
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