Involvement of oxidative stress on cytotoxic and cytostatic effect of L-Carnitine on murine melanoma cells (B16F10)

Autor: Isabela Chagas Silva
Přispěvatelé: Rodrigo Cabral Luiz ., Alessandra Lourenço Cecchini Armani, Larissa Juliani Sanches
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2020
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEL
Universidade Estadual de Londrina (UEL)
instacron:UEL
Popis: A L-carnitina (LC) é uma amina quaternária endógena que transporta ácidos graxos de cadeia longa para dentro da mitocôndria para a β-oxidação. De forma suplementar, esta molécula tem sido utilizada como antioxidante na doença de Alzheimer e na isquemia-reperfusão após AVC, em pacientes com câncer e caquexia, em atividades esportivas, na obesidade, dentre outros. Seu efeito sobre células de câncer é pouco conhecido. Há relatos de efeito citotóxico em células de hepatocarcinoma humano HepG2, no entanto não se sabe se esta molécula pode ser capaz de promover proliferação celular ou induzir citotoxicidade sobre outros tipos de células tumorais. Por este motivo, este trabalho avaliou o efeito citotóxico da L-carnitina sobre células de melanoma murino B16F10. Este modelo foi escolhido uma vez que o melanoma é um tipo agressivo e letal de câncer. Foram testadas concentrações de LC entre 10 e 200mM por 24h. A partir LC 20 mM observamos uma diminuição do número de células e para LC 100 mM e 200 mM houve diminuição da viabilidade celular. Houve um aumento nas células na fase S para a LC 50 mM e na fase G2 para LC 100 e 200 mM e aumento da apoptose para LC 200 mM. Nas concentrações LC 100 e 200 mM observamos indução de estresse oxidativo, revelado por aumento de liperóxidos de membrana celular e dos níveis de glutationa, com redução da atividade da superóxido dismutase e da catalase. O estresse oxidativo foi confirmado com o aumento da marcação nuclear de 8-hidroguanosina (LC 50 mM) e Nrf2 (LC 20 mM). O marcação imunocitoquímica também revelou aumento da marcação nuclear de p53 (LC 50 mM). Por outro lado, as mesmas as concentrações testadas de LC não foram capazes de induzir efeito citotóxico, citotostático ou gerar estresse oxidativo em células de fibroblasto murino NIH-3T3. Nossos resultados apontam que a LC é capaz induzir apoptose em células de melanoma B16F10 e que este efeito é promovido, pelo menos em parte, pela geração de estresse oxidativo. L-carnitine (LC) is an endogenous quaternary amine that transports long-chain fatty acids into the mitochondria for β-oxidation. As a supplement, this molecule has been used as antioxidant in Alzheimer's disease and in ischemia-reperfusion after stroke, in patients with cancer and cachexia, in sport activities, in obesity, among others. Its effect on cancer cells is little known. There are reports of cytotoxic effect on human hepatocarcinome HepG2 cells, however it is not known whether this molecule may be able to promote cell proliferation or induce cytotoxicity on other types of tumor cells. For this reason, this work evaluated the cytotoxic effect of L-carnitine on murine B16F10 melanoma cells. This model was chosen since melanoma is an aggressive and lethal type of cancer. LC concentrations between 10 and 200mM for 24h were tested. From 20 mM LC we observed a decrease in the number of cells and for 100 mM and 200 mM LC there was a decrease in cell viability. There was an increase in cells in the S phase for the 50 mM LC and in the G2 phase for the 100 and 200 mM LC and an increase in apoptosis for the 200 mM LC. At LC 100 and 200 mM concentrations, we observed an induction of oxidative stress, revealed by an increase in cell membrane liperoxides and glutathione levels, with a reduction in the activity of superoxide dismutase and catalase. Oxidative stress was confirmed by increased nuclear labeling of 8-hydroguanosine (LC 50 mM) and Nrf2 (LC 20 mM). The immunocytochemical staining also revealed an increase in the nuclear staining of p53 (LC 50 mM). On the other hand, the same tested concentrations of LC were not able to induce cytotoxic, cytostatic effect or generate oxidative stress in NIH-3T3 murine fibroblast cells. Our results indicate that LC is able to induce apoptosis in B16F10 melanoma cells and that this effect is promoted, at least in part, by the generation of oxidative stress.
Databáze: OpenAIRE
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