Análisis cuali-cuantitativo de ADN genómico extraído de hoja y estípite de x Butyagrus nabonnandii (Prosch.) Vorster

Autor: Oliveira-Neves, Patrícia de, Pereira, Antônio Batista, Cañedo, Andrés Delgado, Souza, Velci Queiroz de, Laindorf, Bruna Lucia, Azambuja, Maike Brum, Rosa, Lurdes Zanchetta da
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2022
Předmět:
Zdroj: Research, Society and Development; Vol. 11 No. 10; e572111033005
Research, Society and Development; Vol. 11 Núm. 10; e572111033005
Research, Society and Development; v. 11 n. 10; e572111033005
Research, Society and Development
Universidade Federal de Itajubá (UNIFEI)
instacron:UNIFEI
ISSN: 2525-3409
Popis: DNA-based identification tools are of great importance in plant genetic studies, where DNA isolation and purification are crucial steps. The aim of the present study was to test the efficiency of conservation and maceration methods of biological materials in the extraction of genomic DNA from leaf and stipe of x Butyagrus nabonnandii (Prosch.) Vorster. The data were analyzed with the help of the software Genes via variance analysis, considering the factorial scheme 3x2x2x2, with three replications (three specimens of the hybrid; two types of biological material – stipe and leaf; two types of conservation – fresh and dehydrated; two types of maceration – with and without liquid nitrogen). The means were analyzed by Tukey test at 5% error probability. Genomic DNA was evaluated by spectrophotometry to determine the concentration. Integrity was determined by agarose gel eletrophoresis. Two primers from the WRKY gene Family were used to test the quality of the DNA obtained in PCR reactions. Statistical analyses revealed significant differences in DNA concentrations between the evaluated methods. Higher amounts of DNA were obtained from the extraction of fresh leaves when compared to dehydrated ones. DNA yield from fresh and dehydrated stipe did not vary between the methods tested. The use of liquid nitrogen can be dispensed, as a result of band patterns in PCR reactions. It was possible to extract quality DNA and sufficient amounts of biological materials from x B. nabonnandii, which amplified the genomic regions of interest. Las herramientas de identificación de ADN son de gran importancia en los estudios genéticos de plantas, donde el aislamiento y la purificación son pasos cruciales. El objetivo del presente estudio fue probar la eficiencia de los métodos de conservación y maceración de muestras de hoja y estípite de x Butyagrus nabonnandii (Prosch.) Vorster en la extracción de ADN genómico. Los datos fueron analisados con el software Genes mediante análisis de varianza, considerando el esquema factorial 3x2x2x2 con tres repeticiones (tres ejemplares del híbrido; dos tipos de material biológico, estípite y hoja; dos tipos de conservación – fresco y deshidratado; dos tipos de maceración – con y sin nitrógeno líquido). Las medias se analizaron por el test de Tukey con 5% de probabilidad de error. El ADN genómico fue evaluado por espectrofotometria para determinar la concentración. La integridad se determinó por electroforesis en gel de agarosa. Se utilizaron dos iniciadores de la família de genes WRKY para comprobar la calidad del ADN obtenido en reacciones de PCR. Los análisis estadísticos revelaron diferencias significativas en las concentraciones de ADN entre los métodos evaluados. Se obtuvieron mayores cantidades de ADN en la extracción de hojas frescas en comparación con las hojas deshidratadas. El rendimiento de ADN del estípite fresco y deshidratado no varió entre los métodos probados. Se puede prescindir del uso de nitrógeno líquido como resultado de los patrones de bandas en las reacciones de PCR. Fue posible extraer ADN de calidad y cantidades suficientes de material biológico de x B. nabonnandii, que amplificó las regions genómicas de interés. Ferramentas de identificação baseadas em DNA são de suma importância em estudos genéticos de plantas, onde o isolamento e a purificação são passos cruciais. O objetivo do presente estudo foi testar a eficiência de métodos de conservação e de maceração de materiais biológicos na extração de DNA genômico de folha e estipe de x Butyagrus nabonnandii (Prosch.) Vorster. Os dados foram analisados com ajuda do software Genes via análise de variância, considerando o esquema fatorial 3x2x2x2, com três repetições (três espécimes do híbrido; dois tipos de material biológico, estipe e folha; dois tipos de conservação, fresco e desidratado; dois tipos de maceração, com e sem nitrogênio líquido). As médias foram analisadas pelo teste Tukey a 5% de probabilidade de erro. O DNA genômico foi avaliado por espectrofotometria para determinar a concentração. A integridade foi determinada por eletroforese em gel de agarose. Foram utilizados dois primers da família gênica WRKY para testar a qualidade do DNA obtido em reações de PCR. As análises estatísticas revelaram diferenças significativas nas concentrações de DNA entre os métodos avaliados. Obteve-se maiores quantidades de DNA a partir da extração de folhas frescas quando comparadas às folhas desidratadas. O rendimento do DNA a partir de estipe fresco e desidratado não variou entre os métodos testados. O uso de nitrogênio líquido pode ser dispensado, conforme resultado dos padrões das bandas nas reações de PCR. Foi possível extrair DNA de qualidade e quantidades suficientes dos materiais biológicos de x B. nabonnandii, que amplificaram as regiões genômicas de interesse.
Databáze: OpenAIRE
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