Role of myosin Va in the subcellular localization of focal adhesion kinase

Autor: Martins Pereira, Simone Alves, 1985
Přispěvatelé: Santos, Aline Mara dos, 1982, Espreafico, Enilza Maria, Antunes, Michelle Bueno de Moura Pereira, Marques-Souza, Henrique, Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Estrutural, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2020
Předmět:
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
Popis: Orientadores: Aline Mara dos Santos, Enilza Maria Espreafico Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As proteínas têm imensa diversidade funcional. Como essas funções são executadas em diferentes compartimentos celulares, as proteínas devem estar localizadas no momento e local adequados quando requeridas. A quinase de adesão focal (FAK), uma tirosina quinase do tipo não receptor, possui um sinal de localização nuclear e também um sinal de exportação nuclear. No citoplasma, a FAK participa das adesões focais, enquanto no compartimento nuclear, FAK interage com fatores de transcrição e regula processos como sobrevivência, inflamação, diferenciação e crescimento celular. A miosina Va é uma mecanoenzima também encontrada no citoplasma e no núcleo. Esta proteína converte energia química em força mecânica via hidrólise de ATP para transportar vesículas secretoras, organelas, proteínas e outras moléculas ao longo dos filamentos do citoesqueleto. Demonstramos em fibroblastos em cultura, que FAK e miosina Va interagem nos extratos citoplasmáticos e nucleares e colocalizam nas fibras de estresse, nas adesões focais, no núcleo e em pontos justapostos ao envoltório nuclear. Também observamos que a inibição da ativação de FAK diminui a interação com a miosina Va e o número de adesões focais, culminando na degradação da miosina Va. Além disso, demonstramos que a redução da expressão de miosina Va, através do silenciamento por interferência de RNA (iRNA), aumenta a concentração de FAK no núcleo e diminui a sua concentração nas adesões focais, sugerindo um papel da miosina na exportação e translocação nuclear de FAK e no posicionamento dessa quinase em regiões subcelulares do citoplasma. Juntos, esses resultados indicam que a miosina Va interage e regula a distribuição subcelular da FAK, transportando essa quinase do compartimento nuclear para o citoplasmático e posicionando-a em estruturas subcelulares, como fibras de estresse e adesões focais. Abstract: Proteins have immense functional diversity. These functions are performed in different cell compartments, and they must be located at the right time and place when required. Focal Adhesion Kinase (FAK), a tyrosine kinase of the non-receptor type, has either nuclear localization and nuclear export signals. In the cytoplasm, FAK takes a role in the focal adhesions. While in the nuclear compartment, FAK interacts with transcription factors and regulates processes such as survival, inflammation, differentiation, and cell growth. The myosin Va is a mecanoenzyme also found in the cytoplasm and in the nucleus. Myosin Va converts chemical energy into mechanical force via ATP hydrolysis to transport secretory vesicles, organelles, proteins, and other molecules along the filaments of the cytoskeleton. Here, we demonstrate that in a culture of fibroblast, myosin Va interacts with FAK in cytosolic and nuclear extracts and colocalize in the stress fibers, in the focal adhesions, and in the nucleus. Super-resolution experiments have also shown that FAK interacts with myosin Va at points juxtaposed to the nuclear envelope. We also observed that inhibiting FAK activation decreases the interaction with myosin Va and the number of focal adhesions, culminating in myosin Va degradation. Additionally, we found that reducing myosin Va expression via gene silencing increases FAK concentration in the nucleus and decreases the concentration in focal adhesions, suggesting a role for myosin in the nuclear export and translocation of FAK towards structures present in the cytoplasm. These results together indicate that myosin Va interacts and regulates the subcellular distribution of FAK, transporting this kinase from the nuclear compartment to the cytoplasmic and positioning it in subcellular structures, such as stress fibers and focal adhesions. Mestrado Biologia Celular Mestra em Biologia Celular e Estrutural CNPQ 131032/2015-1
Databáze: OpenAIRE
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