Caracterização das interações moleculares e mRNAs alvos de proteínas com domínio de ligação ao RNA implicadas no processo de tradução em Leishmania infantum

Autor: ASSIS, Ludmila Arruda de
Přispěvatelé: MELO NETO, Osvaldo Pompílio de, LIMA, Tamara de Carli da Costa
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2019
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFPE
Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)
instacron:UFPE
Popis: CAPES A regulação da expressão gênica em Leishmania tem uma grande dependência do controle da estabilidade e tradução dos seus mRNAs. Em eucariotos, ambos são eventos associados a proteína de ligação a cauda poli-A (PABP) e outras proteínas com domínios de ligação a RNA, as RBPs. Em Leishmania foram descritas três PABPs, sendo que a PABP1 se associa a mRNAs alvos, complexos proteicos e RBPs distintas das PABP2/3. Seu papel funcional, contudo, ainda não está claro. Esse trabalho buscou auxiliar na definição de suas funções a partir da caracterização de RBPs parceiras, as RBP23, DRBD2 e ZC3H41. Extratos citoplasmáticos de Leishmania infantum expressando cada RBP fusionada com o peptídeo HA foram utilizados em ensaios de imunoprecipitação, com seus parceiros e mRNAs alvos identificados por espectrometria de massas e sequenciamento de RNAs. Foi demonstrada a interação preferencial da RBP23 com a PABP1 e o complexo de tradução EIF4G3/EIF4E4, da DRBD2 com as PABP2/PABP3 e da ZC3H41 com as três PABPs. Ensaios de interação proteína-proteína confirmaram uma ligação direta das RBP23 e DRBD2 com as três PABPs, mapeando regiões especificas das PABPs envolvidas nessa ligação. Os mRNAs co-precipitados com a RBP23, e em menor escala a ZC3H41, codificam preferencialmente proteínas ribossomais, semelhante a PABP1 e diferentemente da DRBD2. Estes dados sugerem um novo modelo para o reconhecimento destes mRNAs pelas RBP23 e PABP1 em Leishmania. The regulation of gene expression in Leishmania depends largely on the stability and translation control of its mRNAs. In eukaryotes, both events are associated with poly-A tail binding protein (PABP) and other proteins with RNA binding domains, the RBPs. Three PABPs were described in Leishmania, and PABP1 is associated with target mRNAs, protein complexes and RBPs distinct from those associated to PABP2/3. However, its functional role is still unclear. This work aimed to define its functions from the characterization of partner RBPs, the RBP23, DRBD2 and ZC3H41. Cytoplasmic extracts of Leishmania infantum expressing each RBP fused to HA peptide were used in immunoprecipitation assays, with their partners and target mRNAs identified by mass spectrometry and RNA sequencing. It was demonstrated the preferential interaction of RBP23 with PABP1 and translation complex EIF4G3 / EIF4E4, DRBD2 with PABP2 / PABP3 and ZC3H41 with the three PABPs. Protein-protein interaction assays confirmed a direct binding of RBP23 and DRBD2 with the three PABPs, mapping specific regions of the PABPs involved in that binding. mRNAs co-precipitated with RBP23, and on a smaller scale with ZC3H41, preferentially encode ribosomal proteins, similar to PABP1 and unlike DRBD2. These data suggest a new model for the recognition of these mRNAs by RBP23 and PABP1 in Leishmania.
Databáze: OpenAIRE
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